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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
SuperScript IV反转录酶
- 库存:
5
- 供应商:
研卉生物
- 规格:
50 次反应/10000U
SuperScript IV反转录酶
货号:18090050-50 次反应/10000U
SuperScript™ IV RT 是 SuperScript™ 产品系列中所有 RT-PCR 和 qRT-PCR 应用的首,选。尤其是当重现性和可靠性成为主要考虑事项,以及 RNA 样品中的抑制剂可能干扰 cDNA 合成,进而导致基因表达研究出现偏倚时,我们推荐使用这款产品。
SuperScript™ IV 反转录酶的功能包括:
•显著提高了对多种可能干扰 cDNA 合成的抑制剂的耐受性
• 可对多种样品进行稳健且具有特异性的 cDNA 合成
•较快的反转录酶反应,可将孵育时间从 >50 分钟缩短至 10 分钟
•与 SuperScript™ III RT 相比,持续合成能力显著提高
来源
从表达 M-MLV pol 基因的大肠杆菌中纯化,经修饰可提高热稳定性和半衰期、持续合成能力、抑制剂耐受性并降低 RNase H 活性。
性能和质量检测
脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶及核糖核酸酶检测;cDNA 产物的得率和长度。
单位定义
一单位的 SuperScript™ IV RT 是指在 37°C 下使用 poly(A) oligo(dT)12-18 作为模板/引物,将 1 纳摩尔脱氧核糖核酸在 10 min 内掺入酸可沉淀材料所需要的酶量。
单位反应条件
50 mM Tris-HCl(pH 值 8.3)、4 mM MgCl2、10 mM DTT、50 mM KCl、0.5 mM dTTP、0.4 MBq/mL [3H]-dTTP、0.4 mM poly(A) oligo (dT)12-18 和酶,20 μL,37°C 下 10 min。
• SuperScript IV RT,50 μL (200 U/μL)
• 5X RT 缓冲液,1 mL
• 0.1 M DTT,500 μL
储存在 –30°C 至 –5°C 下。
一、性能参数对比
| 特性 | SuperScript™ III | SuperScript™ IV |
|---|---|---|
| 反应温度 | 50°C | 50–55°C |
| 反应时间 | 50分钟 | 10分钟 |
| 最大cDNA长度 | 12kb | 20kb |
| 抑制剂耐受性 | 良好 | 超高(耐受胍盐/肝素等)4 |
| RNase H活性 | 较低(MMLV突变体) | 极低(专有MMLV突变体) |
| 热稳定性 | 50°C半衰期延长 | 55°C仍保持活性3 |
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文献和实验反转录酶(Reverse transcripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。这种酶需要镁离子或锰离子作为辅助因子,当以mRNA为模板时,先合成单链DNA(ssDNA),再在反转录酶和DNA聚合酶Ⅰ作用下,以单链DNA为模板合成“发夹”型的双链DNA(dsDNA),再由核酸酶S1切成
cDNA synthesis using superscript II
SuperScript II 1 µl water 4 µl Prepare this mix as a master mix and add then 20 µl to each reaction. Synthesize the cDNA in a thermocycler: 1.
依赖于RNA合成DNA的酶。也称为RNA依赖性DNA聚合酶。是含于病毒——致癌RNA病毒(Retrovirus)粒子中的一种酶,以单链RNA为模板,合成具有与此相辅的核苷酸序列的DNA。是1970年由H.M.Temin等和D.Baltimore各自独立发现的。通过此酶首先从病毒RNA合成RNA-DNA杂化物,再从这杂化物合成双链DNA。仅分解 RNA- DNA杂化物RNA部分的核糖核酸酶H活性存在于此酶上。开始认为此酶仅存在于RNA病毒中,但后来由未感染病毒的细胞和正常组织中也分离出同样
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