酵母蛋白表达

酵母蛋白表达

强耀生物科技有限公司已成功构建完整的各种蛋白表达技术平台：包括原核蛋白表达与纯化、酵母蛋白表达与纯化、昆虫细胞蛋白表达与纯化、哺乳动物细胞蛋白表达与纯化。根据客户的需求，我们提供从基因合成，载体构建，基因表达，蛋白纯化、检测等一站式服务。为了保证蛋白纯化的质量，强耀生物建立了严格的产品质控体系及一整套完善的客户服务流程、保密制度以确保为客户提供优质的产品及成熟的服务。 我们的蛋白质团队在优化基因密码子、表达载体的设计和构建、融合对象和标签的选取、特定蛋白纯化系统的选择、蛋白生产工艺的优化等方面，拥有较多的经验。可以满足客户个性化的需求。

酵母蛋白表达
重组蛋白表达与纯化技术服务（P. Pichia表达系统）

强耀生物科技有限公司目前成熟的表达体系包括：原核表达系统(大肠杆菌 E. coli表达系统)、酵母表达系统(P. Pichia)表达建立了严格的产品质控体系及一整套完善的客户服务流程、保密制度以确保为客户提供优质的产品及成熟的服务。 技术服务按步骤收费，您可以选择从以下任意一步开始提供服务或仅选择其中的单独一步，详细价格请垂询。

•酵母表达系统——步骤1. 目标基因亚克隆至酵母表达载体： 
扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
测序验证构建质粒的准确性。
可提供表达载体：pPICZα和pPIC9K 
提供客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。 
服务周期：1周 
•酵母表达系统——步骤2. P. Pichia表达菌株电转化： 
酶切线性化表达质粒。
将表达质粒通过电转化到高效的P. Pichia表达菌株中。
利用蛋白酶去除不需要的纯化标签（Tag），再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
通过PCR鉴定至少挑选5个阳性克隆。
可提供表达菌株：X33，GS115，KM71和SMD1168。 
提供客户：PCR阳性克隆及PCR结果报告。 
时间：1周 
• 酵母表达系统——步骤3. P. Pichia表达菌株筛选： 
将5个阳性克隆于BMGY培养基中扩增，然后换至BMMY培养基中，并加入Methanol诱导表达目标蛋白。
SDS-PAGE电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
如果培养上清中检测不到表达，则通过将上清浓缩20倍作用再检测，或通过Western-blot方法检测目标蛋白表达（客户需要提供相关抗体）。
提供客户：任意一个客户需要的阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。 
时间：2周 
•酵母表达系统——步骤4. P. Pichia表达菌株表达优化：
挑选20个阳性克隆进行常规表达筛选，并对其中表达最好菌株优化表达条件。
对挑选出来的单克隆菌株，优化培养及诱导条件（培养基，菌体密度，Methanol浓度，诱导时间等），提高目标蛋白的表达量。 
提供客户：任意三个客户需要的阳性克隆菌株及优化表达条件结果报告。 
时间：2周 
•酵母表达系统——步骤5.目标蛋白表达及纯化：
摇瓶培养1L重组酵母菌，诱导表达目标蛋白。
通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
通过Western-blot验证目标蛋白正确性。 
提供客户：纯化好的目标蛋白1~10mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度最高可达90%以上。 
时间：2~3周 
•酵母表达系统——步骤6.目标蛋白的再加工及详细检测 
对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。
内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。
通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。 
服务内容： 
1.复性研究： 
利用多达18种不同复性缓冲液的体系，对目标蛋白进行小量复性试验提供复性后样品供客户检测。
可根据客户要求，按照其中一种样品的复性条件制备小量的复性蛋白。
可提供具体的复性缓冲液配方及复性工艺。
2.除内毒素
3.过滤除菌
4.冻干
5.HPLC检测
6.质谱检测
提供客户：加工后的终产品及相关实验和检测报告。 
时间：1~2周 
•酵母表达系统——步骤7. 大规模制备 
提供客户：合格的目标蛋白及服务报告。
时间：协商