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外泌体检测服务套餐
外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200 nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯状形态、双层膜结构，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。包括肿瘤细胞在内几乎所有类型的细胞（免疫细胞、神经细胞、干细胞)，都可以产生并释放exosome。
Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质rRNA和microRNA，Exosome可通过细胞膜受体直接激活受体细胞，也可运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至细胞器进入受体细胞，参与细胞间通讯。Exosome在免疫应答、炎症反应、血管生成、凋亡、凝血和废物处理等生理过程发挥关键作用，不同细胞来源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不尽相同，可作为多种疾病的早期诊断标记物，也能作为靶向药物的载体进行疾病治疗。
miRNA是一类22nt左右大小的非编码分子， 它可以通过外泌体从一个地方转运到另外一个地方行使基因沉默功能。通过检测外泌体中miRNA表达变化，可以发现外泌体中miRNA特异性功能。
二、研究现状
1、外泌体研究的主要应用
外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等方方面面。有研究表明肿瘤来源的外泌体参与到肿瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换，从而导致大量新生血管的生成，促进了肿瘤的生长与侵袭。
肿瘤
- 肿瘤转移。来自白血病干细胞的外泌体促进急性骨髓性白血病（AML）细胞的增殖、迁移和抑制细胞凋亡。
- 治疗靶标。利用外泌体递送小干扰RNA来沉默KRAS G12D，从而特异性高效靶向至胰腺癌细胞，以显著降低RAS活化、癌细胞增殖和转移过程。
- β细胞将含有蛋白质和miRNA的外泌体释放到细胞外，并可转移到其他代谢器官或免疫内皮细胞，有利于维持葡萄糖体内平衡或造成胰岛素抵抗。
- 外泌体介导miR-155从平滑肌细胞转移到内皮细胞导致了内皮细胞的损伤促进动脉粥样硬化
- 疾病诊断。在酒精性肝病、NASH、病毒性肝炎、药物性肝损伤和肝细胞癌中发现循环EVs的水平上升。
- 预后标志。
2017年国自然中共有249项外泌体的资助，其中111项是和肿瘤细胞的逃逸、耐药、转移等有关，102项和miRNA、lncRNA主题相关，众所周知外泌体中非编码RNA的比例中，miRNA为最多70%，其余的是lncRNA和circRNA等。
三、套餐内容
1）外泌体提取服务。
超速离心、过滤离心、试剂盒提取等。
2）外泌体电镜检测鉴定。
大小（30-200nm）、形态也呈现出多样性，有研究分为9个类别依次为：单囊泡、双囊泡、 多膜泡、小双层膜泡、椭圆膜泡、小管、大管、不完整的膜泡、不规则膜泡，其中在不同类别的囊泡中可以发现三个附加特征：表面具涂层的膜泡、内含纤维的膜泡、电子致密囊泡。
3）纳米颗粒数检测。
通过Nanosight 可视型纳米颗粒分析仪确定外泌体颗粒数。
4）WB鉴定蛋白标志物。
蛋白包括CD63，CD81，CD9，HSP70，TSG101等。
四、活动时间：2022.8.22-9.21
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分析（NTA）和 WB marker 鉴定。 二、TEM 鉴定外泌体形态： 将提取的外泌体样本置于冰盒中，使用移液枪吸取外泌体样本于铜网上静置 1 min。(用镊子夹铜网要轻，防止铜网夹破)。再将铜网上的外泌体样本吸干，使用移液枪吸取醋酸双氧铀染色液室温染色。随后将染色完成的样本放于灯下烤。样本制好后，观察拍照，保存图片。结果如下： 图一 TEM 鉴定外泌体的形态 从 TEM 结果中可以看出，从肿瘤组织中分离得到的外泌体具有典型的杯托状结构，且数量比较多。 三
保存。 13、如何鉴定提取的外泌体？ 通常会用到：透射电镜检测（形态）、NTA 粒径检测（大小）、Western Blot 检测等方法对提取的外泌体进行鉴定。在进行 Western Blot 检测时，常用的外泌体标志蛋白有CD63、CD9、CD81、TSG101 等。 14、提取的外泌体进行 Western Blot 前是否需要加入 RIPA 试剂裂解？ 需要。一般按照 1:1 的比例加入强 RIPA 试剂，或推荐使用外泌体蛋白专用裂解液。 15、进行外泌体 Western Blot 鉴定时有无内参
Tracking Analysis），该技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一。NTA 技术的样本处理简单、能保证外泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。 图五 外泌体 NTA 图 Western Blot 分子标志物检测： WB 可以用来鉴定外泌体的标志蛋白是否存在于样本中。外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如 CD9、CD63 和 CD81；细胞质蛋白，如肌动蛋白（Actin）和钙磷脂结合蛋白（Annexins）；参与生物功能的分子，如凋亡转接基因 2 互作蛋白 X
