- ￥1380
- 原平皓生物
- PC126
- 2025年07月11日
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大量
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原平皓生物
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100 rxn
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· 产品介绍：
Turbo Script One-Step RT-PCR Kit 是具有高灵敏度、高效合成能力和高扩增效率的一步RT-PCR法终点检测和分析R NA的试剂盒。利用该试剂盒结合基因特异性引物及模板R NA，能够安全方便地在单管中进行反转录反应和PCR扩增反应。该试剂盒包括Turbo Script RT Enzyme Mix以及特制的同时适合于反转录和PCR扩增的通用反应缓冲液。Turbo Script RT Enzyme Mix中包括了Turbo Script Transcriptase和一种热启动的DNA聚合酶，Turbo Script Transcriptase是一种经遗传性改变的莫洛尼鼠白血病病毒(Moloney murine leukemia virus)反转录酶(M-MLV Reverse Transcriptase), 即在野生型反转录酶的基础上引进了两个点突变, 其中一个点突变(D524N)去除了与其相联的核糖核酸酶H(一种专门切割DNA与RNA杂交链上RNA分子的酶)活性,另一个点突变(Q84A)增加了该酶与模板-引物的亲和力, 从而增加了酶的活性和持续合成能力。同M-MLV Reverse Transcriptase(点突变缺失RNase H)相比, Turbo RT(双突变)合成的cDNA量更多、更长。组成中的热启动酶是一种结合有特异性抗体的具有高效扩增能力和高特异性的DNA聚合酶。
· 产品特点：
• 从反转录到PCR反应在同一管内完成，大大降低了外源物质的污染及RNA降解的机会。
• 使用基因工程改造的反转录酶，增加了酶与模板的亲和力，从而增加了酶的活性和合成能力。
• 使用结合有特异性抗体的热启动酶，增加了PCR反应的特异性和灵敏性。
• 通用的反应缓冲液为反转录酶和DNA聚合酶提供可靠的反应条件。
· 产品储存：
-20°C 保存。浓度：5U/μl。
| 说明书: | 下 载 | ||
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文献和实验检测或定量。另外，这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术，更灵敏，更易于操作。 RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在逆转录缓冲液中进行
分离高质量RNA 成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般的RNA纯化方法是使用异硫氰酸胍／酸性酚的一步法。Trizol试剂法（见下图 ）将一步法加以提高，可以从多种组织和细胞中提取高质量的非降解RNA。Trizol试剂法可以从最少100个细胞或1mg组织
差异，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术，更灵敏，更易于操作。 RT-PCR的基本原理（图4.1）。首先是在逆转录酶的作用下从RNA合成 cDNA，即总RNA中的mRNA在体外被反向转录合成DNA拷贝，因拷贝DNA的核苷酸序列完全互补于模板mRNA，称之为互补DNA（cDNA）；然后再利用DNA聚合酶，以cDNA第一链为模板，以四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）为材料
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