- ￥658
- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海翌圣
- 11121ES60
- 2026年04月21日
企业认证
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![Hifair Ⅱ cDNA第一链合成即用型预混液 (gDNA digester plus)[可申请试用]](https://img1.dxycdn.com/2019/0521/518/3346692225656114832-14.jpg!wh200)
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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
有效期1年
- 英文名：
Hifair II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
100T
产品信息
| 产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
促销价（元） |
| Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) |
11121ES60 |
100 T |
935.00 |
748.00 |
产品描述
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有gDNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase而开发。该酶热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
该试剂盒包含gDNA digester，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6 和oligo (dT)18，用户可根据需要，选择Random Primers N6，Oligo (dT)18或Gene Specific Primers作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分
| 组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 11121ES60 (100 T) |
| 11121-A |
RNase-free H2O |
2×1 mL |
| 11121-B |
5×gDNA digester Buffer |
200 μL |
| 11121-C |
gDNA digester |
100 μL |
| 11121-D |
5×Hifair® Ⅱ Buffer plus |
400 μL |
| 11121-E |
Hifair® Ⅱ Enzyme Mix |
200 μL |
| 11121-F |
Oligo (dT)18 (50 μM) |
100 μL |
| 11121-G |
Random Primers N6 (50 μM) |
100 μL |
【注】：1）5×Hifair® Ⅱ Buffer plus包含gDNA digester抑制剂和dNTP。
2）Hifair® Ⅱ Enzyme Mix包含RNase inhibitor。
运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期18个月。
注意事项
1）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染。
2）建议RNA是溶于水而不是TE中，因为TE会干扰gDNA去除以及逆转录反应。
3）可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果与使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit（Cat#11119）效果一致。但是请勿将gDNA digester与11119ES中的5×Hifair® Ⅱ Buffer配套使用，因其不含终止gDNA去除反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
关于逆转录引物的选择
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18 ，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。
3）Random Primers N6适用性较广，适用于mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板。
4）使用Random primers N6，进行2 kb以下的cDNA合成时，Random primers N6的使用量为 1-2 μL；2 kb 以上的cDNA合成时，Random primers N6 的使用量为0.4-1 μL。
第一链cDNA合成操作步骤
一、若实验需要去除残留基因组DNA
1. 在RNase-free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
| 组分 |
使用量 |
| RNase-free H2O |
To 10 μL |
| 5× gDNA digester Buffer |
2 μL |
| gDNA digester |
1 μL |
| Total RNA |
1 ng -5 μg* |
| or mRNA |
1 ng-500 ng* |
【注】：* 若后续实验为qPCR，Total RNA投入量为1 ng -1 μg；mRNA的投入量为1 ng-100 ng。若基因的表达丰度很低，最多可投入5 μg Total RNA或500 ng mRNA。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
| 组分 |
使用量 |
| RNase-free H2O |
To 20 μL |
| 上一步的反应液 |
10 μL |
| 5× Hifair® Ⅱ Buffer plus |
2 μL* |
| Hifair® Ⅱ Enzyme Mix |
2 μL |
| Random Primers N6 (50 μM) |
1 μL |
| or Oligo (dT)18 (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) |
or 1 μL |
| or 1 μL |
【注】：1）逆转录引物：荧光定量实验推荐Random Primers N6与Oligo (dT)18 1:1混合使用。
2）5×Hifair® Ⅱ Buffer plus加入量（*）：因gDNA digester buffer的影响，本体系中只需要加2 μL。
3）建议先加入5×Hifair® Ⅱ Buffer plus混匀后再添加反转录引物，以保证完全抑制gDNA digester的活性。
3. 逆转录程序设置
| 温度 |
时间 |
| 25℃ |
5 min |
| 42℃ |
30 min |
| 85℃ |
5 min |
【注】：逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到50℃。
4. 逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
二、若实验无需去除基因组DNA
1. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
| 组分 |
使用量 |
| RNase-free H2O |
To 20 μL |
| Total RNA |
1 ng -5 μg |
| or mRNA |
1 ng-500 ng |
| 5× Hifair® Ⅱ Buffer plus |
4 μL* |
| Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers N6 (50 μM) |
1 μL |
| Hifair® Ⅱ Enzyme Mix |
2 μL |
【注】：1）逆转录引物：荧光定量实验推荐Random Primers N6与Oligo (dT)18 1:1混合使用。
2）5×Hifair® Ⅱ Buffer plus加入量（*）：因无gDNA digester buffer的影响，本体系中需要添加4 μL。
【可选步骤】：针对复杂模板，建议RNA、H2O、反转录引物在65℃保温5 min后，冰上迅速冷却。然后再加入反转录酶和Buffer。
2. 逆转录程序设置参照上述基因组去除后的逆转录程序。
HB220607
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文献和实验[2] Wu W, Zhang J, Cao X, Cai Z, Zhao F. Exploring the cellular landscape of circular RNAs using full-length single-cell RNA sequencing. Nat Commun. 2022;13(1):3242. Published 2022 Jun 10. doi:10.1038/s41467-022-30963-8(IF:14.919)
[3] Pei P, Qin H, Chen J, et al. Computational design of ultrashort peptide inhibitors of the receptor-binding domain of the SARS-CoV-2 S protein [published correction appears in Brief Bioinform. 2021 Jul 17;:]. Brief Bioinform. 2021;22(6):bbab243. doi:10.1093/bib/bbab243(IF:11.622)
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[5] Xiang H, Tao Y, Jiang Z, et al. Vps33B controls Treg cell suppressive function through inhibiting lysosomal nutrient sensing complex-mediated mTORC1 activation. Cell Rep. 2022;39(11):110943. doi:10.1016/j.celrep.2022.110943(IF:9.423)
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