PC18-TRUEscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit (OneStep gDNA Removal)（第一链反转录试剂盒）
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PC18-TRUEscript 1st Strand cDN

A Synthesis Kit (OneStep gDNA Removal)（第一链反转录试剂盒）
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  • ￥595
  • 艾德莱/aidlab
  • 国产
  • PC1803
  • 2025年12月15日
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    • 供应商：

      昊鑫生物

    • 规格：

      100 次x 20μl 反应体系

    PC18-TRUEscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit (OneStep gDNA Removal)（第一链反转录试剂盒）
    PC18-TRUEscript 1st Strand cDN

    包装量:

    Components PC1803
    5 × TRUE Reaction Mix 400 μl
    gDNA Remover 100 μl
    Oligo(dT) (0.5 μg/μl) 100 μl
    Random primer (N6) 100 μl
    RNase free H₂O 1.5 ml

     

    产品储存： -20℃保存，有效期 12 个月
     
    制品说明： 本制品以 RNase 为模，采用预混合技术 5×TRUE Reaction Mix（已经预混合了 TRUEscriptHT RTase、RNase Inhibitor、dNTP Mixture、Buffer）高效合成第一链 cDNA，操作简单。本制品采用分子进化技术多点突变的新一代反转录酶，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA 合成以及高比例的全长 cDNA 文库的构建等。本试剂盒中使用了具有 DNA 分解活性的特殊 gDNA Remover，只需要一步操作，即可同时完成基因组消除与逆转录反应，极大简化了操作步骤，避免了复杂过程造成的样品污染与 RNA 降解的风险。
     
    适用范围： 第一链 cDNA 合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的克隆和检测。
    产品特点：
    1. 新一代反转录酶大幅度提高了稳定性和反转录效率。合成 cDNA 长度高达 12 kb 以上。
    2. 全预混的 Reaction Mix，只需加入 RNA、引物和水，简单快速完成反转录。
    3. gDNA 的去除采用先进的一步基因组消除技术，最短时间最简单完成去除基因组 DNA 步骤。
    4. RNA 模板的体积最多可加到总体积的 75%，非常适合于低浓度 RNA 模板的逆转录反应。
    5. 预混合 Mix 在 - 20℃不冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。
    6. 用户可根据需要，可灵活选择 Oligo (dT)、Random primer 或基因特异性引物作为逆转录引物。
    引物选择：
    1. 如果模板为真核生物来源，一般情况下优先推荐 Oligo (dT)，与真核生物 mRNA 的 3' PolyA 配对，可获得最高产量的全长 cDNA。
    2. 如果对一些物种，不能确定 mRNA 是否有 polyA 尾的情况下，优先推荐Oligo (dT)，不成功再尝试基因特异性引物 (GSP) 和 Random primer 为引物。
    3. 基因特异性引物 (GSP) 的特异性最高。但有些情况下，用于 PCR 反应的 GSP 无法有效引导第一链 cDNA 合成，可改用 Oligo (dT) 或 Random primer，重新进行逆转录。
    4. Random primer 特异性最低，所有 RNA 包括 mRNA，rRNA，tRNA 均可以作为 Random primer 的模板。当目标区域具有复杂二级结构或者 GC 含量较高，或者模板为原核生物来源，使用 Oligo (dT) 或基因特异性引物 (GSP) 无法有效引导 cDNA 合成时，可使用 Random primer 为引物。
    5. 如果合成 cDNA 下游用于荧光定量 PCR，可将 Oligo (dT) 与 Random primer 混合使用（各加 1μl/20μl 反应体系），可使 mRNA 的各个区域 cDNA 合成效率相同，有助于提高定量结果的真实性和重复性。
    第一链 cDNA 合成（以 20 μl 反应体系为例）
    1. 加入以下成分（使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心收集液体到管底。）

    PC18-TRUEscript 1st Strand cDN

    * 如果反转录时不需要去除基因组 DNA，直接略去 gDNA Remover 成分不加即可。
     
    2.轻轻混匀后
    如用 Oligo (dT) 或基因特异性引物 (GSP)，42℃孵育 30-50 min（如产物用于 qPCR，42℃孵育 15 min）
    如用 Random Primer，25℃孵育 10 min，42℃孵育 30-50 min（如产物用于 qPCR，42℃孵育 15 min）
    注意：如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域，可尝试将反应温度提高至 50℃，有助于提高产量。
    3. 85℃加热 5 sec 失活 TRUEscript HT RTase。
    4. 得到的 cDNA 产物可立即用于 PCR 反应，或在 - 20℃保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在 - 70℃保存。cDNA 应避免反复冻融。
     
    RT-PCR
    建议取 1/10-1/5 体积 (2-4 μl) 的反转录产物作为 PCR 模板。丰度高的可以酌情适当稀释 cDNA 后使用。
     
    建议 PCR 条件
    请按照选择的艾德莱 PCR 试剂或者其它厂家 PCR 试剂说明书进行。
     
    建议艾德莱配套 PCR 试剂
    1. 常规扩增：PC09-2×Taq PCR MasterMix 和 PC80-2×F8 FastLong PCR MasterMix
    2. 高保真扩增：PC82-2×A8 FastHiFi PCR MasterMix 和 PC84-2×A8 FastHiFi PCR MasterMix
     
    注意事项:
    1. 避免 RNase 污染。
    2. 为保证反转录成功建议使用高质量的 RNA 样品。
    3. 可选步骤（一般不需要）：如果 RNA 模板 GC 含量丰富或者有复杂二级结构、或者扩增 cDNA 长度超过 3kb，可以先只加 RNA 模板、引物和 RNase free H₂O 混匀，65℃变性 5 分钟，冰上冷却，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
    4. 5 × TRUE Reaction Mix 和 gDNA Remover 含甘油很粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾损失。5 × TRUE Reaction Mix 内包含的酶均为过量，即使每次按照 3.6 μl-3.8 μl 使用，gDNA Remover 按照 0.8 μl-0.9 μl 也不影响使用效果。


    PC18-TRUEscript 1st Strand cDN

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