Roche货号3359247910与11209256910地

DIG标记的Northern杂交试验指导

dH2O至1ml，用无菌石蜡膜堵住杯口，倒转混匀。 4.将两个比色杯置于分光光度计中，调入射光波长，用空白溶液分别调整T至100、OD至0，然后测定样品在260nm、280nm、230nm的OD值。 RNA浓度和纯度分析 浓度计算：对于单链RNA，OD260=1.0时，RNA浓度为40μg/ml，按照上述稀释方式，即OD260=0.1时，其RNA浓度为1μg/ml。 纯度分析：纯净的RNA样品其OD260/OD280的比值应

我收集的几个Northern杂交protocol（同位素，DIG，生物素等），供大家参考！

Ficoll 400 + 10g PVP + 10g BSA(Penta x组分V) 用DSPC处理水溶解，定容至500ml，过滤后分装成每份25ml 于-20℃保存。 预杂交溶液：5× SSC 5× Denhardt 溶液 50%(w/v) 甲酰胺 1%(w/v) SDS 100μg/ml 鲑鱼精DNA（用前加热变性后加入） 杂交溶液：DIG-RNA探针用预杂交液稀释成适当浓度 2×洗膜缓冲液：2×SSC 加入0.1% SDS 0.5×洗膜缓冲液：0.5× SSC加入0.1% SDS

Non-radioactive Probes

for Northerns) 1. Solutions: 10X NTP mixture: 10 mM ATP 10 mM CTP 10 mM GTP 6.5 mM UTP 3.5 mM DIG-UTP 2. Reaction: a. Add the following reagents in order on ice: *Purified template (1 µg) + dH2O in 13 µl 10X NTP mix 2 µl 10X Transcription buffer