- ￥2154
- Roche
- 11277073910
- 2025年12月31日
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10
- 供应商：
上海觅拓生物科技有限公司
- 保存条件：
−20°C
- 规格：
40 μL
一般描述
标记效率：来自1μg 线性模板DNA的约10μg的全长Digoxin标记RNA被转录。检测时间：135分钟
样本材料
线性化质粒DNA：
待转录的DNA将会被克隆至含有SP6，T7或T3 RNA聚合酶启动子并相邻于多接头的合适转录载体的多接头位点。对于“流失”转录本的合成，质粒是通过限制性酶进行线性化的。限制性酶生成的5′-突出应当被使用；3′ 突出应当被避免。线性化的模板DNA应当通过酚氯仿抽提及乙醇沉淀进行纯化，以避免RNase的污染。对于′run around′转录环状质粒DNA会被使用。
PCR产物：
含有RNA聚合酶启动子序列的PCR片段也可被用作转录的模板。推荐在转录之前对PCR片段使用HIghPure柱进行纯化。
通过这种方法，特定长度的DIG标记单链RNA探针通过体外转录被生成。在标准条件下，DIG-11-UTP通过SP6、T7和T3 RNA聚合酶以大约每20到25个核苷酸的间隔插入转录产物中。DIG RNA标记混合物专门设计用于优化转录缓冲液的SP6, T7和T3 RNA聚合酶。
便捷的核苷酸混合物用于基于Digoxin-11-UTP的RNA标记
内含物
10x 溶液带有：10 mM ATP, CTP, GTP (各), 6.5 mM UTP, 3.5 mM DIG-11-UTP.
默克生命科学致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品为一种安全的化学品。 DIG系统是一种灵敏且高性价比的替代方案，可用于核酸的放射性标记和检测。有许多已发表论文证明了DIG系统的通用性，因此，使用放射性标记不再是标记用于杂交的DNA的唯一选择。
特异性
热灭活：添加 2 μl 0.2 M EDTA (pH 8.0) 终止反应。应用
利用SP6，T7及T3 RNA聚合酶通过体外转录而使用Digoxin-11-UTP进行RNA标记。DIG标记RNA已用于多种杂交技术：- Northern blots
- Southern blots
- 斑点印迹
- 菌斑或克隆提升
- RNase保护实验
- 染色体, 细胞, 及组织切片原位
特点和优势
DIG RNA标记混合物专门设计用于来自Roche并配以优化的转录缓冲液的SP6, T7和T3 RNA聚合酶。质量
经DIG RNA标记试剂盒和DIG核酸检测试剂盒检测的功能。其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
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文献和实验如下四类：直接标记法，加尾标记法，基于逆转录反应的标记方法，基于RNA克隆扩增的标记方法。 常用于RNA标记的方法按标记物性质分为： 放射性同位素标记：32P、35S、3H 非放射性标记：半抗原荧光素化学发光物质 地高辛 地高辛标记RNA常用的方法是将DIG与UTP共价结合形成DIG-UTP，以DIG-UTP、ATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶T7、SP6经体外转录合成标记RNA。此法多用于RNA探针的制备，一般每20~25个核苷酸可引入一个地高辛分子
如果您需要制备RNA探针的话，推荐您使用Northern Starter Kit。该试剂盒以线性的DNA为模板，通过SP6, T7或是T3 RNA聚合酶的作用将DIG-11-UTP掺入到转录的RNA中，借助化学发光底物CDP-Star检测。另一个产品DIG RNA Labeling Kit也可用于RNA探针的标记。 末端标记寡核苷酸Oligonucleotide
【交流】DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论
性分析（RFLP）等。 Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹（blotting）；二是固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的，Southern印迹杂交故因此而得名。 Southern印迹杂交技术是分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件
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