新型固定组织基因组DNA提取试剂盒价格厂家

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应新型固定组织基因组DNA提取试剂盒价格厂家，产品信息：

类别：DNA纯化

英文名：NewPurify FFPE DNA Extraction kit

产品名	产品编号	包装规格
新型固定组织基因组DNA提取试剂盒	WE0172	50次

编号：WE0172

规格：50次

英文名：NewPurify FFPE DNA Extraction kit

品牌：百奥莱博

产地：北京

  本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋组织中有效纯化基因组DNA。本品使用专门优化脱蜡剂和裂解液，释放福尔马林固定或组织切片样本中的DNA，不涉及有机试剂二甲*，无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除游离DNA的福尔马林交联，有效提高DNA的产量和纯度；优化的缓冲系统使裂解液中的DNA可特异结合到吸附膜上，抑制剂通过两步漂洗步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。同时配置高效微量吸附柱，洗脱体积可低至20μl。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型、二代测序和药物基因组学研究等。

  从福尔马林固定、石蜡包埋样本中分离的DNA分子量通常低于新鲜或冷冻样本中的DNA。DNA片段化的程度取决于样本类型、储存时间以及固定的条件。

 

试剂盒组成：

 

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩)	13ml
Buffer GW2(浓缩)	15ml
Buffer EB	10ml
Buffer DS	10ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
离心吸附柱DF及收集管	50套
离心管(L-1.5ml)	50个

 

自备试剂：无水乙醇。

 

实验前准备及重要注意事项/strong>：

1、获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久(＞1年)则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。

2、确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。

3、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，以免影响其活性。

4、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

5、使用前请检查Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS于56℃水浴重新溶解。

6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入2μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如果需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。

7、实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56℃。

 

操作步骤：

 

石蜡包埋样本

1、用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织后切成5-10μM的薄片。

2、取约1×1cm2的切片(共约3-8片切片)置于离心管(自备)中，加入160μl Buffer DS，涡旋震荡10秒。短暂离心将样本收集到管底。56℃孵育3分钟，水浴锅中取出后静置，降至室温后进行下一步操作。

注意：如果样品表面暴露在空气中，最初的2-3片弃掉不用。

3、上述管中加入180μl Buffer GTL，涡旋震荡混匀，12000rpm离心1分钟，溶液分为两层。取20μl 蛋白酶K 加入到下层溶液中，移液器小心吹吸混匀。

4、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。12000rpm离心1分钟，使用200μl枪头沿管壁小心吸取下层的水相于新的离心管中。

注意：

1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。

2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。

3)如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置2分钟。

 

福尔马林等固定液中的样本

1、取约20 mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4)，涡旋振荡，12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，弃上清，重复3次。

2、上述管中加入180μl Buffer GTL，20μl 蛋白酶K ，涡旋震荡混匀。

3、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。

注意：

1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。

2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。

4、12000rpm离心1分钟，使用200μl枪头沿管壁小心吸取上清到新的离心管中。

注意：如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置2分钟。

5、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡混匀后加入200μl无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。

注意：

1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即充分混匀。

2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。

3)如果需要对多个样品进行操作，可以将Buffer GL和无水乙醇事先混匀后加样。

6、将步骤5所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱DF中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。

9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。

注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应。

10、将吸附柱置于一个新的1.5ml收集管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μlBuffer EB或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

注意：

1)洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5，pH值低于7.0时洗脱效率不高。

2)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。

 

储存条件：室温(15～30℃)。

新型固定组织基因组DNA提取试剂盒价格厂家专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
WE0324	蛋白质研究	BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(WB IHC)
WE0188	DNA纯化	血液基因组DNA批量提取试剂盒(96孔板)
WE0310	蛋白质研究	TBST(pH8.0,10×)
WE0222	其他分子生物学试剂	无毒RNA酶清除剂
WE0168	核酸电泳和回收	琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
WE0216	核酸电泳和回收	50×TAE
WE0197	RNA纯化	血液RNA提取试剂盒(含DNase I)
WE0367	二抗	罗丹明标记驴抗小鼠IgG(H+L)
WE0296	蛋白质研究	一步法Western专用封闭液
WE0217	其他分子生物学试剂	无RNA酶水
WE0262	蛋白质研究	哺乳动物蛋白抽提试剂盒
WE0248	克隆与表达	DNA快速连接试剂盒
WE0234	基因结构和功能	cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)
WE0147	核酸扩增(PCR)	一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)
WE0221	其他分子生物学试剂	6×DNA上样缓冲液
WE0397	DNA纯化	游离DNA样本保存管(5ml,PET)
WE0404	RNA纯化	RNA样本保存液
WE0176	DNA纯化	血液基因组DNA提取试剂盒
WE0242	核酸电泳和回收	UltraStain DNA Marker
WE0105	核酸扩增(PCR)	BAmp DNA Polymerase
WE0198	RNA纯化	动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)

 

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