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- Cmbio
- 上海
- CM-6024K
- 2025年08月31日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
零下80度
- 保质期：
1年
- 英文名：
F-TOP10Chemically Competent Cell
- 库存：
1000只
- 供应商：
上海淳麦
- 规格：
20*100ul
F-TOP10
F-TOP10 快速转化感受态细胞
F-TOP10 快速转化感受态细胞基因型：
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL
(Strr)endA1 nupG
F-TOP10 快速转化感受态细胞简要说明：
TOP10 菌株来源于 MC1061，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与 DH10B 高度类似 (DH10B 为 galE15 型，而 TOP10 为 galU 型)。-CMbio-
TOP10 生长速度快，37℃，10 小时可见克隆。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验。-CMbio-
-CMbio-F-TOP10 感受态细胞经特殊工艺制作，无需 42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min 内完成转化、 涂板操作，pUC19 质粒检测转化效率可达 1~5×108 cfu/μg DNA。
F-TOP10 快速转化感受态细胞快速转化操作方法 (10min)
1. 提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热 -CMbio-
2. F-TOP10 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用
手拨打 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。-CMbio-
3. 用 200μl 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经 37℃预热的 2YT 或 LB 培养基上。-CMbio-
4. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 13 h。-CMbio-
F-TOP10 快速转化感受态细胞快速热激转化操作方法 (25min,可提高转化效率)
1. F- TOP10 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用 手拨打 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。-CMbio-
2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟 (晃动会降低转化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB，37℃，
200 rpm 复苏 10 分钟，涂板 (均匀，表面无水渍)。-CMbio-
3. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15h。-CMbio-
F-TOP10 快速转化感受态细胞注意事项：
1. F-TOP10 快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb 质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作： F-TOP10 感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5 分钟后，加入目的 DNA 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰中静置 20 分钟。42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰中静置 2 分钟。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 复苏 30 分钟，涂板。
2. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降 低转化效率，混入目的 DNA 时应轻柔操作。-CMbio-
3. F- TOP10 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效 率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可按热激转化操 作，增加孵育步骤。-CMbio-
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上海淳麦生物科技有限公司专注于感受态细胞、质粒、载体、农杆菌、酵母等生命科学领域的产品研发和技术服务支持。
上海淳麦生物科技有限公司在感受态细胞的研发方面，实力雄厚，拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类，共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面，拥有了大肠杆菌和农杆菌电击感受态种类，极大提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。
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文献和实验本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化
型信息可以判断目的质粒是否可以使用这个感受态细胞来进行扩增，以及是否可以进行目的实验。例如 DH5α基因型：F-, φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi-1, gyrA96 , relA1。基因型信息中有 lacZΔM15，说明其表达产物可以与 PUC 质粒编码表达的β-半乳糖苷酶的α肽段实现α互补，因此可以选择用 DH5α感受态来扩增
【交流】转载：JM109，DH5a，BL21这些感受态有何区别
] 5：TOP10菌株 该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。 基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG 6：HB101菌株 该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验 基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara
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