stable 电转化感受态细胞

Stable
Stable Chemically Competent Cell

产品规格:

	Stable 10×100μl pUC19(control vector) 10pg/μl  10μl

Stable感受态细胞基因型:

F' proA+B+ lacIq  ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)  ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15

e14- Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS -mcrBC)

Stable感受态细胞简要说明：

Stable 菌株是 NEB 公司开发的高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株，具有与 Stbl2，Stbl3 完全不同的基因型，但是表现出比 Stbl2，Stbl3 更优异的性能，特别适合慢病毒或具有末端重复序列 DNA 片段的克 隆。基因组含有重组酶 recA1 rel A1 突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；同时含有核 酸酶 endA1 突变，避免了提取质粒过程中核酸酶的污染，大大提高了高纯度病毒质粒的产量和质量。- -
-CMbio-lacZΔM15 的存在使 Stable 可用于蓝、白斑筛选，此菌株具有四环素和链霉素抗性，Stable 感受态细 胞经特殊工艺制作，pUC19 检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。
Stable感受态细胞操作说明
1. Stable 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，6 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用手

拨打 EP 管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置 25 分钟。-CMbio-

2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 5 分钟，晃动会降低转化效率。-CMbio-

3. 向离心管中加入 0.9 mL 室温 S.O.C.或 LB 培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。-CMbio-

4. 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟或 30℃，225 rpm 复苏 90 分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错 误重组的概率，若转化 control pUC19 计算转化效率，则需 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟）-CMbio-
5. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 S.O.C.或 LB 培养基 上。
6. 将平板倒置放于 37℃或 30℃培养箱过夜培养。 (当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率， 若转化 control pUC19 计算转化效率，则需 37℃培养过夜)。
Stable感受态细胞优点应用：
1. Stable 菌株与 Stbl3 相比，基因组含有 endA 突变，提高了病毒质粒的产量和纯度。-CMbio- 2. Stable 菌株比 Stbl3 生长速度快，倍增时间是 Stbl3 的 1.5 倍。-CMbio-
3. . Stable 菌株基因组中含有 fhuA 突变，赋予其对噬菌体 T1 的抗性。-CMbio-

4. Stable 菌株具有较高的转化效率，pUC19 检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。

5. Stable 菌株基因组中含有 lacZΔM15，可用于蓝白斑筛选实验。-CMbio-

6. Stable 菌株特别适合于不稳定 DNA 片段的克隆，及逆转录病毒/慢病毒载体的构建和扩繁。
Stable感受态细胞注意事项：

1. 对不稳定 DNA 片段的克隆或逆转录病毒/慢病毒载体的构建，涂板后平板应在 30℃培养，以减少发生错误重组的 概率。-CMbio-
2. 制备高纯度病毒质粒时，应使用新鲜转化的平板接菌，新鲜菌液提取质粒，菌液不可低温保存后使用。

3. 对不稳定的克隆或病毒质粒优先以质粒状态保存，尽量避免将质粒保存在大肠杆菌细胞中。-CMbio