EGY48感受态细胞

EGY48酵母感受态细胞基因型：
MATα, ura3, his3, trp1, LexA_{op (x6)}-LEU2


EGY48酵母感受态细胞简要说明：
 EGY48菌株是Clontech公司开发的LexA 系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；Transformation  marker为: his3, trp1, ura3，报告基因为：LEU2；报告基因UAS（上游激活序列）来源于LexA op(x6)，只有当Bait和Prey互作时才能启动LEU2表达。

EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。
质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；

质粒pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白（Prey）的融合蛋白；
报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op(x8) ，只有当Bait和Prey互作时才能启动LacZ表达。 High5TM系列Y2HGold感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，经PGBKT7质粒检测转化效率>10⁴cfu/μg DNA 。
 
EGY48酵母感受态细胞操作说明：
 1. 取100 μl冰上融化的 EGY48感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5ug，Carrier DNA（95-100度5min,快速冰浴，重复一次）10 ul ，PEG/LiAc  500ul并吸打几次混匀，30度水浴30 分钟（15 min时翻转6-8次混匀）。

2. 将管放42度水浴15min（7.5 min时翻转6-8次混匀）。 

3. 5000 rpm离心40s弃上清，ddH₂O 400ul重悬，离心30s弃上清。

4. ddH2O 50ul重悬，涂板,29℃培养48-96h。

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