细胞凋亡检测试剂盒V(POD)哪里卖

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名称：细胞凋亡检测试剂盒V(POD)哪里卖
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：ZN1529
规格：100T
保存条件：-20℃冰冻保存一年。
工作原理：
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活
，细胞自身的染色质或 DNA 被切割，出现单链或双链缺口，并产生与 DNA 断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将地高*(代"辛")标记的
dUTP(DIG-dUTP)标记至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 结合在 DNA 断点部位，可以通过生物标记的抗地高*(代"辛")抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后，再结合链酶亲和素-过氧化物酶(SABC)，然后加入显色底物
DAB 予以显示。凋亡的细包核呈黄色，从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容：
1.标记缓冲液(Labeling Buffer)5ml
2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)100μl
3.DIG-dUTP(×20)100μl
4.封闭液(Blocking Reagent)20ml
5.生物素化抗地高*(代"辛")抗体(×100)100μl
6.SABC(×100)100μl
7.Proteinase K(×200)250μl
8．抗体稀释液 20ml
阳性对照片2张
用户自备试剂：
1．多聚赖*酸或 APES。
2．0.01M TBS,调 pH 7.5(配法:1L 双蒸馏水中加入 8.5 克*化*,1.2 克 Tris，用纯乙酸或盐*(代"酸")调 pH。)
3．DAB显色试剂盒，也可自配显色剂。
操作步骤：
1．样品处理
(1)玻片预先用多聚赖*酸或 APES 进行处理。
(2)细胞涂片和冰冻切片：最重要的是及时固定。用 4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0---7.6)室温下固定 30—60分钟。0.01M PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤 2分钟×2次。
(3)组织：有条件时应及时固定。常规 4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0---7.6)或 10%中性缓冲福尔马林固定 4 小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水(脱蜡务必干净)。
2．新鲜配制 3%H2O2，室温处理 10分钟。蒸馏水洗涤 2分钟×3次。
3．标本片加 0.01M TBS 1:200 新鲜稀释 Proteinase K 37℃消化 1—15分钟,0.01M TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化 10—60 秒钟。新鲜石蜡切片消化 5-10
分钟。陈旧石蜡切片消化 10-15分钟)。
4．标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer)20μl/片,以保持切片湿润。然后按每张切片取TdT和 DIG-d-UTP 各 1μl ，加入到 18μl 标记缓冲液中，混匀。甩去切片上多余液体后加
混合好标记液，20μl/片。置样品于湿盒中，37℃标记2 小时。
5．0.01M TBS洗2分钟×3次。
6．加封闭液 50μl/片，室温 30分钟，甩掉封闭液，不洗。
7．用抗体稀释液 1：100稀释生物素化抗地高*(代"辛")抗体：(取 1ml 抗体稀释液加生物素化抗地高*(代"辛")抗体 10μl)，混匀后 50μl/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应 30分钟。
0.01M TBS洗2分钟×3次。
8．用抗体稀释液 1：100 稀释 SABC：取 1ml 抗体稀释液加 SABC 10μl，混匀后 50μl/片加至切片。37℃反应 30分钟。0.01M TBS洗5分钟×4次。
9．DAB 显色：取 1ml 蒸馏水，分别加入 DAB 试剂盒中 A，B，C 试剂各一滴，混匀后加至标本片上，显色 10-30分钟左右。水洗。
10．苏木素轻度复染。0.01M TBS洗，蒸馏水洗。脱水，透明，封片。显微镜观察。
结果判定：
细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞。
注意事项：
1.试剂盒严格-20℃存放。
2.初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心 5分钟，使试剂沉至管底。
3.检测过程中切勿使样品干涸。

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