细胞凋亡检测试剂盒V(POD)

特别提示：包括细胞凋亡检测试剂盒V(POD)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞凋亡检测试剂盒V(POD)
产品货号：ZN1529
产品规格：100T

保存条件：-20℃冰冻保存一年。
工作原理：
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活
，细胞自身的染色质或DNA 被切割，出现单链或双链缺口，并产生与 DNA 断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将*高辛标记的
dUTP(DIG-dUTP)标记至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 结合在 DNA 断点部位，可以通过生物标记的抗*高辛抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后，再结合链酶亲和素-过氧化物酶(SABC)，然后加入显色底物
DAB 予以显示。凋亡的细包核呈黄色，从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容：
1.标记缓冲液(Labeling Buffer)5ml
2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)100μl
3.DIG-dUTP(×20)100μl
4.封闭液(Blocking Reagent)20ml
5.生物素化抗*高辛抗体(×100)100μl
6.SABC(×100)100μl
7.Proteinase K(×200)250μl
8．抗体稀释液 20ml
阳性对照片2张
用户自备试剂：
1．多聚赖氨酸或APES。
2．0.01M TBS,调 pH 7.5(配法:1L 双蒸馏水中加入 8.5 克氯化钠,1.2 克 Tris，用纯乙酸或盐酸调 pH。)
3．DAB显色试剂盒，也可自配显色剂。
操作步骤：
1．样品处理
(1)玻片预先用多聚赖氨酸或APES 进行处理。
(2)细胞涂片和冰冻切片：zuì重要的是及时固定。用 4%多聚jiǎ醛/0.01M PBS(pH7.0---7.6)室温下固定 30—60分钟。0.01M PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤 2分钟×2次。
(3)组织：有条件时应及时固定。常规 4%多聚jiǎ醛/0.01M PBS(pH7.0---7.6)或10%中性缓冲福尔马林固定 4 小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水(脱蜡务必干净)。
2．新鲜配制 3%H2O2，室温处理 10分钟。蒸馏水洗涤 2分钟×3次。
3．标本片加 0.01M TBS 1:200 新鲜稀释 Proteinase K 37℃消化 1—15分钟,0.01M TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化 10—60 秒钟。新鲜石蜡切片消化 5-10
分钟。陈旧石蜡切片消化 10-15分钟)。
4．标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer)20μl/片,以保持切片湿润。然后按每张切片取TdT和 DIG-d-UTP 各 1μl ，加入到 18μl 标记缓冲液中，混匀。甩去切片上多余液体后加
混合好标记液，20μl/片。置样品于湿盒中，37℃标记2 小时。
5．0.01M TBS洗2分钟×3次。
6．加封闭液 50μl/片，室温 30分钟，甩掉封闭液，不洗。
7．用抗体稀释液 1：100稀释生物素化抗*高辛抗体：(取 1ml 抗体稀释液加生物素化抗*高辛抗体 10μl)，混匀后 50μl/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应 30分钟。
0.01M TBS洗2分钟×3次。
8．用抗体稀释液 1：100 稀释 SABC：取 1ml 抗体稀释液加 SABC 10μl，混匀后 50μl/片加至切片。37℃反应 30分钟。0.01M TBS洗5分钟×4次。
9．DAB 显色：取 1ml 蒸馏水，分别加入 DAB 试剂盒中 A，B，C 试剂各一滴，混匀后加至标本片上，显色 10-30分钟左右。水洗。
10．苏木素轻度复染。0.01M TBS洗，蒸馏水洗。脱水，透明，封片。显微镜观察。
结果判定：
细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞。
注意事项：
1.试剂盒严格-20℃存放。
2.初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心 5分钟，使试剂沉至管底。
3.检测过程中切勿使样品干涸。

除了细胞凋亡检测试剂盒V(POD),，我公司还供应以下相关产品：



名称：细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（MTT法）
货号：YT122
规格：500次
本试剂盒被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结 晶状的深紫色产物formazan。在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附 近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可 以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。

试剂盒组份：
MTT——————25mg
MTT溶剂——————5ml
Formazan溶解液——55ml

注意事项：
1. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问 题。一方面，由于96孔板周围一圈zuì容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面 ，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
2. MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻 至全部融解后使用。
3. MTT配制成溶液后为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色 变为灰绿色时，请勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解 后使用。
4. Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必 须在全部溶解并混匀后使用。

储存条件：4℃，有效期一年。

名称：PCNA细胞增殖检测试剂盒(IHC法)
货号：KFS333
规格：50T
PCNA 是细胞DNA 多聚酶的“δ”辅助蛋白，是真核细胞DNA 合成时所必需的一种酸性核蛋白。

PCNA 在细胞核内合成，并储存在核内，细胞处于静止状态时，其含量很低，当细胞进入增殖周期中，其表达明显增加，故PCNA 的表达高低可反映细胞增殖的活跃程度。在活检或手术切除的组织切片或细胞涂片上，用免疫技术检测到PCNA 表达增高有助于肿瘤组织的诊断。

名称：DAPI双链DNA染料
货号：SY0495
规格：10mg
DAPI，也称DAPI dihydrochloride，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。因为DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。

DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。

CAS：28718-90-3
分子式：C16H17Cl2N5
分子量：350.25
纯度：>90% (from N)

注意事项
1)DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
2)荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3)为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

名称：CCCP(50 mM)细胞凋亡诱导剂
货号：HR0470
规格：100μl
CCCP，即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone，一种质子载体(H+ ionophore)，是一种强效的线粒体氧化磷酸化解偶联剂，促使线粒体内膜对H+产生通透性，导致线粒体内膜两侧的膜电位丧失，诱导凋亡发生。也可作用于叶绿体膜，抑制光合作用；CCCP还可抑制内质网-高尔基体(ER-Golgi)之间的蛋白转运，高亲和力结合细胞色素C氧化酶。
CCCP是采用优质试剂原料配制，用于生物学相关实验。本品是溶于DMSO的CCCP溶液，浓度为50mM，常用作一种阳性对照来诱导细胞凋亡，并配合线粒体膜电位检测来进行相关研究。
我公司可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

储存条件：-20℃避光保存。
【注】：
●试剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

使用方法：

使用注意事项：
● 收到本品(CCCP，50 mM)后按照10-50μl的小量分装，冻存在-20℃，避免反复冻融。
● 推荐工作浓度为10-100μM，初次实验可按照1000×稀释起始浓度(如1μl起始母液加入1ml细胞培养液)进行凋亡诱导20min，随后进行JC-1或者JC-10线粒体膜电位检测。
●对于特定的细胞，CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料决定。
请根据实验安排或参考文献使用。
根据需要使用。
直接用纯水或培养基稀释配制。