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- roche
- 11684817910
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- 2025年08月31日
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- 供应商：
上海研卉生物
- 英文名：
In Situ Cell Death Detection Kit, POD
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5
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现货
- 规格：
1 kit (50 tests)
11684817910 In Situ Cell Death Detection Kit, POD
11684795910 In Situ Cell Death Detection Kit, Fluorescein
12156792910 In Situ Cell Death Detection Kit, TMR red
一、 原理：
TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish ）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。
二、 器材与试剂
器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；
试剂：试剂盒含TdT 10×、荧光素标记的dUTP 1×、标记荧光素抗体的HRP；自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5 μl 20×DAB+1μL 30%H2O2+94 μl PBS）、蛋白酶K，工作液（10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl， pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 in 0.1% sodium citrate，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DNase 1（3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl，pH 7.5， 10 mM MgCl2，1 mg/ml BSA）等。
三、 实验步骤
操作流程图：制作石蜡切片→脱蜡、水合→细胞通透→加TUNEL反应液→加converter-POD→与底物DAB反应显色→光学显微镜计数并拍照。
具体操作步骤：
1. 用二甲苯浸洗2次，每次5min；
2. 用梯度乙醇（100、95、90、80、70%）各浸洗1次，每次3min；
3. PBS漂洗2次；
4. 用蛋白酶K工作液处理组织15-30 min 在21–37°C（温度、时间、浓度均需摸索）或者加细胞通透液8min；
5. PBS漂洗2次；
6. 制备TUNEL反应混合液，处理组用50μl TdT+450μl 荧光素标记的dUTP液混匀；而阴性对照组仅加50μl 荧光素标记的dUTP液，阳性对照组先加入100μl DNase 1，反应在15~25℃×10min，后面步骤同处理组。
7. 玻片干后，加50μl TUNEL反应混合液（阴性对照组仅加50μl 荧光素标记的dUTP液）于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×1h。
8. PBS漂洗3次；
9. 可以加1滴PBS在荧光显微镜下计数凋亡细胞（激发光波长为450~500nm，检测波长为515~565nm）；
10. 玻片干后加50μl converter-POD于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×30min。
11. PBS漂洗3次；
12. 在组织处加50~100μlDAB底物，反应15~25℃×10min；
13. PBS漂洗3次；
14. 拍照后再用苏木素或甲基绿复染，几秒后立即用自来水冲洗。梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。
15. 加一滴PBS或甘油在视野下，用光学显微镜观察凋亡细胞（共计200~500个细胞）并拍照。可结合凋亡细胞形态特征来综合判断（未染色细胞变小，胞膜完整但出现发泡现象，晚期出现凋亡小体，贴壁细胞出现邹缩、变圆、脱落；而染色细胞呈现染色质浓缩、边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状/凋亡小体）
产品描述
Features and Benefits
灵敏：对凋亡细胞的标记（细胞染色）的最大强度高于切口平移法。
快速：使用荧光素dUTP，可以在TUNEL反应后直接分析样品，但必须在加入次级检测系统之前。
方便：使用荧光素dUTP直接标记，可以在检测过程中验证TUNEL反应的效率。
精确：在分子水平（DNA链断裂）检测细胞凋亡，检测处于凋亡早期的细胞。
灵活：无需底物；可以选择多种染色方法。
General description
该试剂盒用于在免疫组化中使用光学显微镜检测并定量单细胞水平的细胞凋亡。
Other Notes
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
包装
1个试剂盒包含3种组分。
Principle
In Situ Cell Death Detection Kit, POD是基于对细胞凋亡早期阶段的DNA单链和双链断裂进行检测。
对凋亡细胞进行固定和通透性处理。然后，将细胞置于包含有TdT和荧光素dUTP的TUNEL反应混合液中进行孵育。在此孵育过程中，TdT催化将荧光素dUTP连接到单链或双链DNA的游离3′-OH基团上。进行洗脱步骤之后，用带有过氧化物酶标记的抗荧光素抗体对DNA损伤位点结合的dUTP进行标记。洗脱去除未结合的酶偶联体之后，对免疫复合物留存的POD进行底物显色。
Preparation Note
储存条件（工作液）：TUNEL反应混合液
TUNEL反应混合液应当在使用前制备，不宜保存。在使用之前应一直置于冰上。
Converter-peroxidase
Converter-peroxidase融化后应保存于2~8 °C 下（最长保存6个月）。
备注： 注意：不要冻存。
样本材料：Cytospin和细胞涂片的准备，玻片上生长的贴壁细胞，以及冰冻和石蜡包埋的组织切片。
Application
该原位细胞死亡检测试剂盒, POD是一种精准、快速并简便的非放射性技术用于在细胞和组织中在单细胞水平对凋亡的细胞死亡进行检测和定量。因此，该原位细胞死亡检测试剂盒可用于多种不同的检测系统。
• 举例包括：在基础研究和日常病理检测中对冷冻及石蜡包埋福尔马林固定组织切片中独立的凋亡细胞进行检测
• 在癌症研究和临床肿瘤学中对恶性细胞对药物诱导凋亡的敏感性进行测定
• 通过双染过程对异质性细胞群中正在经历细胞死亡的细胞进行分析
罗氏细胞凋亡检测试剂盒大全：
11684817910-6,759.32
In Situ Cell Death Detection Kit, POD-50 tests
(Roche)
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(Roche)
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文献和实验的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
罗氏公司TUNEL细胞凋亡检测程序 （In situ cell death detection kit-POD法） 一、 原理： TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT
