北京现货大肠杆菌BL21(DE3)pLysS化学感受态细胞哪

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名称：北京现货大肠杆菌BL21(DE3)pLysS化学感受态细胞哪里卖
英文名：E.coli BL21 (DE3)plysS Chemical Competent Cell
编号：BTN90507
产地：国产|进口
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)plysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。该菌株带有质粒plysS，具有*霉素抗性，此质粒含有表达T7 溶菌酶的基因，T7 溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG 诱导的表达。本感受态细胞具有*霉素抗性，适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
菌株基因型为：F- ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)pLysS Camr

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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·Tris饱和酚-*仿-异戊醇混合液(DNA提取用)
编号：BTN100805B
英文名称：Phenol-Chloroform-Isoamylol
规格：250mL
本产品是Tris饱和酚和*仿和异戊醇的25:24:1的预混液，可以替代Tris饱和酚，用于抽提核酸，去除其中的蛋白质和脂溶性物质。跟Tris饱和酚相比，它不再需要*仿抽提。同时使用本产品不容易产生倒相现象(就是*酚相在上层，水相在下层)。A型pH＜5.0，为RNA提取专用；B型pH＞7.8，为DNA提取专用。

储存条件：常温运输和保存、避光。有效期一年。

相关知识：
Q：*酚提取法的局限在哪里？
A：酚提取法的局限是不能去除核酸以外的其他水溶性的多糖和糖蛋白(Howe曾经用酚提取法来提取糖蛋白，文献见Meth. Enzymol. 28，236，1972)，所以在用酚提取+醇沉淀法从富含多糖的样品(如植物)和富含糖蛋白的样品(如血液、软骨)中提取DNA或RNA时，很容易产生多糖污染。

Q：离心后为何*酚相消失？
A：酚跟水互溶，互溶比例跟温度、离子强度、去污剂浓度相关有时(如65℃时)可以达到彻底互溶。酚相消失可能就是上述原因造成，由于液体成本一般不能随意改动，所以解决办法一是用冷冻离心机、二是增加酚的用量、三是直接使用酚-*仿-异戊醇混合液，将酚抽提和*仿抽提合二为一。

Q：饱和酚为何呈淡黄色或棕色？
A：*酚本身是无色，但为了防止其氧化，一般加入了一定比例的抗氧化剂8-羟基喹*(代"啉")，后者是淡黄色或棕色(取决于浓度)，所以酚也呈淡黄色或棕色。


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