Rosetta(DE3)pLySs感受态细胞

Rosetta(DE3)pLySs感受态细胞基本信息
感受态细胞名称: Rosetta(DE3)pLySs, Rosetta DE3 pLySs, Rosetta-DE3-pLySs
菌株类型: E.coli
产品目录号: 70956-3, 70956-4
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: Rosetta(DE3)pLySs感受态细胞菌株基因型
抗性: 氯霉素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 蛋白表达
诱导方法: IPTG
菌株特点:
Rosetta系列菌株来源于BL21系列宿主菌，该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码子，增加了真核细胞的蛋白表达水平。

Rosetta(DE3)pLySs来源于Rosetta(DE3)，菌株含有pRARE质粒，能够提供AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA稀有密码子的tRNA，该质粒具有氯霉素抗性。

Rosetta(DE3)pLySs载体通过提供稀有密码子，使得该宿主菌相对于其他大肠杆菌，能够提供更加“通用”的蛋白质表达，从而提升目的蛋白表达水平。

DE3是溶源性的 λDE3, 所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。

含有pLSs质粒，pLySs质粒能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。
Rosetta(DE3)pLySs感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
Rosetta(DE3)pLySs感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，Rosetta(DE3)pLySs感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。