YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer) 核

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北京百奥莱博专业生产供应YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer) 核酸扩增(PCR)，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer) 核酸扩增(PCR)
英文名：YT Taq DNA Polymerase
品牌：百奥莱博
编号：YT373
YT Taq DNA Polymerase简称YT Taq酶，是一种兼顾了高保真性和高扩增效率的DNA聚合酶，是我司优先推荐的基因PCR克隆用酶。

YT Taq 酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。同时YT Taq 酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，YT Taq 酶有5’至3’外切酶活性，但YT Taq 酶没有反转录酶活性。

由于YT Taq 酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为1.6×10-6，略低于Pfu酶的2.6×10e-6
。
YT Taq 酶的DNA扩增效率大大高于Pfu酶，和Taq酶的扩增效率比较接近。因此YT Taq 酶很好地兼顾了扩增效率和扩增的准确性。

用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、T载体克隆等各种常规PCR反应。
1)用YT Taq 酶扩增产生的PCR产物带有3’-dA overhangs，可以用于基于T载体的PCR片断克隆。
2)YT Taq 酶可以扩增长度达5kb的DNA片断，最长可以扩增长达10kb的DNA片断。通常适合扩增3kb以下的DNA片断。

活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
10×YT Taq Buffer (with Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl, 20mM MgSO4, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。

失活或抑制：酚*仿抽提可以使YT Taq 酶失活。

储存条件：-20℃

注意事项：
1）由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用YT Taq 酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2）YT Taq 酶有3’至5’的外切酶活性，在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此YT Taq 酶一定要最后加入，并且要在冰浴上操作。

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·Mn-SOD和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法)
编号：YT310
英文名称：Cu/Zn-SOD and Mn-SOD Assay Kit with WST-8
规格：100次
本试剂盒是一种基于WST-8的显色反应，通过比色来检测细胞、组织或其它样品中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD或总SOD活性的试剂盒。本试剂盒可以检测细胞或组织匀浆液上清、全血、红细胞抽提物、血清等生物样品中的SOD活性。一个试剂盒共可以进行100次检测。

试剂盒组分：
SOD检测缓冲液———————70ml
WST-8———————————800μl
酶溶液———————————100μl
反应启动液(40X)——————60μl
Cu/Zn-SOD抑制剂A——————500μl
Cu/Zn-SOD抑制剂B——————500μl

超氧化物岐化酶能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化*(H2O2)和氧气(O2)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。

目前有多种SOD活性测定法，其中NBT(氮蓝四唑)法由于使用方便而被广泛使用。但NBT法产生的甲臜染料水溶性差，易和被还原的黄嘌呤氧化酶相互作用，抑制百分率达不到100%等，从而使检测的灵敏度和精确度受到影响；细胞色素C法也是一种常用来检测SOD活性的方法，但细胞色素C其氧化活性高，易受样品中的还原剂干扰，另外该方法需要连续测定吸光度值，对于SOD的检测灵敏度比较低，并且不太适合大批量样本的检测。

目前测定SOD比较先进的方法包括WST-1法和WST-8法，其中WST-8法比WST-1法更加稳定、灵敏度更高。本试剂盒采用了目前测定SOD方法中稳定性更好、灵敏度更高的的WST-8法。WST-8法的原理参考下图，WST-8可以和黄嘌呤氧化酶催化产生的超氧化物阴离子反应产生水溶性的甲臜染料(formazan dye)，该反应步骤可以被SOD所抑制。通过对WST-8产物的比色分析即可计算SOD的酶活力。


基于黄嘌呤氧化酶藕联反应体系和WST-8的SOD酶活力检测原理图。XO：xanthine oxidase。

WST-8的反应产物是稳定的水溶性产物，可以通过单个时间点的吸光度检测来测定SOD活力，适合高通量筛选研究。同时WST-8法测定SOD酶活力时，最大抑制百分率可以接近100%，并且可以不受一些常见的干扰因素的干扰，使检测效果比其它的一些常见方法显著改善。

本试剂盒的检测不受样品中过氧化*的干扰。很多细胞和组织样品中含有内源性的过氧化*，会干扰SOD的检测。本试剂盒通过添加适量过氧化*酶等特殊方法，能有效去除常规样品中过氧化*的干扰。例如，对于SOD标准品的检测，标准品中添加高达0.1mM的过氧化*时，对于检测结果仍无显著影响。

哺乳动物编码3种SOD。在大部分组织中，含量最高的是定位在细胞浆中的Cu/Zn-SOD。Mn-SOD主要表达在线粒体中，并且Mn-SOD是可以被诱导表达的。Mn-SOD在某些情况下也可以定位在细胞浆中。有些组织或体液中会含有第三种SOD，extracellular SOD，简称EC-SOD。EC-SOD也是一种Cu/Zn-SOD，和编码细胞浆Cu/Zn-SOD的基因相似性很高，但有所不同。综上所述，细胞或组织内共有两类SOD，即铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)。这两种SOD酶活性的总量就是总SOD的酶活性。当用Cu/Zn-SOD的抑制剂抑制其酶活性时测定得到的就是Mn-SOD的酶活性。如果此时同时测定总的SOD酶活性，就可以计算出Cu/Zn-SOD的酶活性。

KCN或NaCN可抑制CuZn-SOD酶活性，也被大量用于测定Mn-SOD的酶活性。 但KCN或NaCN都具有剧毒，并且对Cu/Zn-SOD的抑制百分比达不到很接近100%。

本试剂盒采用了一种无毒的两步双重抑制Cu/Zn-SOD的方法，在避免使用有毒药品的情况下同时确保了对于Cu/Zn-SOD的抑制百分比达到高度接近100%，即对于Cu/Zn-SOD的抑制效果显著优于KCN或NaCN。使对于Cu/Zn-SOD或Mn-SOD酶活力的测定更加安全和准确。

注意事项：
1. 待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。
2. 细胞或组织等样品制备时不能采用含有Triton X-100等去垢剂的溶液，否则会干扰本试剂盒的检测。
3. 抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰，例如0.1mM ascorbic acid，5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色，如果设置了使用说明中的空白对照3，就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。
4. Cu/Zn-SOD抑制剂A对人体有刺激性，使用时请注意适当防护。

储存条件：-20℃，有效期6个月。


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