一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)现

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)现货促销，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)现货促销
产地：国产|进口
英文名：Super TaqMan OneStep RT-qPCR Kit
品牌：百奥莱博
规格：100次
  本试剂盒是采用探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效，提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。

试剂盒组成：

 

组份	100次
2×Super TaqMan OneStep Buffer	1.4ml
Super OneStep Enzyme	100μl
RNase-Free Wat er	1ml

注意事项：
1、本试剂盒中试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、本试剂盒中的各试剂应尽量避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-qPCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
5、本试剂盒推荐使用特异性探针，建议采用专业的设计软件进行设计。

使用方法：
以下举例为常规的反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应的改进和优化。(反应液的配置请在冰上进行)

1、将RNA模板、引物、2×Super TaqMan OneStep Buffer、Super OneStep Enzyme和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系：
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×Super TaqMan OneStep Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Probe，10μM	0.5μl	0.2μM
Super OneStep Enzyme	1.0μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常RNA模板的量以10 pg-100ng为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。

3、混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-PCR反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
逆转录	45℃	20 min
PCR预变性	95℃	2-5 min
变性	95℃	15 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	30-45 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、2-5 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

欲咨询购买一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)现货促销，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·FITC标记山羊抗大鼠IgG(H+L)
编号：WE0373
英文名称：Goat Anti-Rat IgG(H+L), FITC Conjugated
规格：100μl
本产品为FITC(硫*酸荧光素)标记的经亲和纯化的山羊抗体，特异识别大鼠IgG重链和轻链，其检测灵敏度高，本底低。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学、细胞化学、流式细胞分析等研究，在临床检验上也用于细菌、病毒和寄生虫的检验及自身免疫病的诊断等。

免疫原：大鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：对于大多数实验(1：25-100)


·HRP标记抗c-Myc标签单克隆抗体
编号：WE0333
英文名称：HRP Conjugated Anti c-Myc Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：20μl|100μl
本抗体为经辣根过氧化物酶(HRP)直接标记的抗c-Myc标签鼠单克隆抗体，可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的c-Myc标签(EQKLISEEDL)， 而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测c-Myc Tag融合蛋白。本产品经HRP直接标记，无需使用二抗，可直接用相应酶底物显色或化学发光法检测目的蛋白，减化了实验步骤，避免由二抗交叉反应引起的非特异性条带。

抗体类型：鼠IgG
免疫原：人工合成多肽
标记物：HRP
应用范围：WB(1：1000-5000)、ELISA(1：1000-20000)


一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)现货促销关键词：一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针),Super TaqMan OneStep RT-qPCR Kit,WE0147


·30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶液(29:1)
编号：WE0291
英文名称：30% Acr-Bis(29：1)
规格：2×250ml
  30%Acr-Bis(29:1)即30%的聚丙*(代"烯")酰胺-N,N"-亚甲双丙*(代"烯")酰胺(Acrylamide-N,N"-Methylene*(代"b")isacrylamide)的水溶液，其中Acrylamide与-N,N"-Methylene*(代"b")isacrylamide 的比例为29：1。本产品常用于配制各种浓度的变性及非变性聚丙*(代"烯")酰胺(PAGE)凝胶，进行常规的蛋白或核酸电泳实验，使用方便。

操作步骤：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)， 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。

附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围

SDS-PAGE 分离胶浓度	最佳分离范围
6%胶	50-150 kD
8%胶	30-90 kD
10%胶	20-80 kD
12%胶	12-60 kD
15%胶	10-40 kD

附表2. 配制SDS-PAGE分离胶

分离胶浓度	凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
		纯水	30%Acr-Bis(29:1)	SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)	10%APS	TEMED
6%	5ml	2.75	1.0	1.25	0.05	0.004
	10ml	5.5	2.0	2.5	0.1	0.008
	15ml	8.25	3.0	3.75	0.15	0.012
	20ml	11	4.0	5	0.2	0.016
8%	5ml	2.42	1.33	1.25	0.05	0.003
	10ml	4.8	2.7	2.5	0.1	0.006
	15ml	7.25	4.0	3.75	0.15	0.009
	20ml	9.7	5.3	5	0.2	0.012
10%	5ml	2.08	1.67	1.25	0.05	0.002
	10ml	4.17	3.33	2.5	0.1	0.004
	15ml	6.25	5.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	8.3	6.7	5	0.2	0.008
12%	5ml	1.75	2.0	1.25	0.05	0.002
	10ml	3.5	4.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	5.25	6.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	7.0	8.0	5	0.2	0.008
15%	5ml	1.25	2.5	1.25	0.05	0.002
	10ml	2.5	5.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	3.75	7.5	3.75	0.15	0.006
	20ml	5	10.0	5	0.2	0.008

附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶

凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
	纯水	30%Acr-Bis(29:1)	SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)	10%APS	TEMED
2ml	1.14	0.34	0.5	0.02	0.002
4ml	2.28	0.68	1	0.04	0.004
6ml	3.42	1.02	1.5	0.06	0.006
8ml	4.56	1.36	2	0.08	0.008

储存条件：2～8℃


一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)现货促销关键词：一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针),Super TaqMan OneStep RT-qPCR Kit,WE0147


·AP标记山羊抗兔IgG(H+L)
编号：WE0391
英文名称：Goat Anti-Rabbit IgG, AP Conjugated
规格：100μl
本产品为碱性磷酸酶标记的经亲和纯化的山羊抗体，特异识别兔IgG，对其他种属IgG无明显交叉反应，检测灵敏度高，本底低，可用于Western Blot和ELISA检测。AP即碱性磷酸酶，可以催化BCIP/NBT等底物显色或催化适当的化学发光试剂产生化学发光。

免疫原：兔IgG
缓冲液：0.01M Tris-HCl，0.25M NaCl，50%甘油，pH8.0
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
应用范围：WB(1：2000-10000)、ELISA(1：2000-20000)

·酵母基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0181
英文名称：Yeast Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从酵母样品中提取高纯度的总DNA，本品无需使用*酚、*仿等有机溶剂抽提，可获得最大为50 kb的DNA，同时对100 bp的DNA片段也能有效的回收。本试剂盒采用优化的缓冲液体系使裂解液中的DNA高效结合在硅胶膜上，而其他污染物可流过膜，使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度的DNA。提取的DNA可直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
Lyticase Working Buffer	30ml
Lyticase	300μl
Glass Beads	2g
吸附柱DM及收集管	50套

保存条件：Lyticase -20℃，其他组分室温(15～30℃)。

自备试剂：无水乙醇，β-巯基乙醇。

产品特点
1、适用于从酵母样品中分离纯化高纯度总DNA。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀，彻底去除污染物及下游反应抑制物，快速提取高品质DNA。
3、Lyticase酶与玻璃珠共同作用，有效破除酵母细胞壁。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。对于有些细胞壁较厚以及在培养阶段会产生大量代谢物的酵母，建议在生长早期收集样品。
3、Lyticase Working Buffer在使用前请加入β-巯基乙醇，使其终浓度为0.1%。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL和Buffer GL于65℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。

操作步骤：
1、取1-5ml酵母培养物(最多不超过5×107个细胞，一般对于酿酒酵母OD600=1.0时，相当于1-2×107细胞/ml)，12000rpm(～13400×g)离心1分钟，收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
注意：菌液较多时，可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2、酵母细胞壁的去除：向菌体中加入600μl Lyticase Working Buffer(使用前检查是否加入β-巯基乙醇，使其终浓度为0.1%)，并加入5μl Lyticase，充分混匀。30℃处理30分钟。4000rpm(~1,500×g)离心10分钟，弃上清，收集沉淀。
注意：以上为5×107酵母细胞Lyticase用量，根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同，所用的Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整。
3、向沉淀中加入200μl Buffer GTL，加入40 mg玻璃珠(Glass Beads)，涡旋5分钟。
4、加入20μl 蛋白酶K 混匀。55℃振荡水浴至细胞完全裂解。若无振荡水浴箱，温育期间每20-30分钟颠倒混匀一次。(一般不超过1小时细胞即可完全裂解)。
注意：如需去除RNA，在上述步骤完成后加入4μl 100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
5、12000rpm离心5分钟，小心吸取上清至新离心管中。
6、加入200μl Buffer GL，充分混匀。70℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次，12000rpm离心5分钟，将上清移到一个新的离心管中。
注意：若孵育后溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取的DNA不纯。
7、加入200μl无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀。短暂离心，使管壁和管盖上的液体集中到管底。
8、将步骤7所得溶液和沉淀全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤10。
11、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
12、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

我公司生产供应销*(代"售")的核酸扩增(PCR)正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)现货促销。