YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer)

特别提示：包括YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer)
英文名称：YT Taq DNA Polymerase
产品货号：YT373
产品规格：200U|1000U

YT Taq DNA Polymerase简称YT Taq酶，是一种兼顾了高保真性和高扩增效率的DNA聚合酶，是我司优先推荐的基因PCR克隆用酶。

YT Taq 酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。同时YT Taq 酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，YT Taq 酶有5’至3’外切酶活性，但YT Taq 酶没有反转录酶活性。

由于YT Taq 酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为1.6×10-6，略低于Pfu酶的2.6×10e-6
。
YT Taq 酶的DNA扩增效率大大高于Pfu酶，和Taq酶的扩增效率比较接近。因此YT Taq 酶很好地兼顾了扩增效率和扩增的准确性。

用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、T载体克隆等各种常规PCR反应。
1)用YT Taq 酶扩增产生的PCR产物带有3’-dA overhangs，可以用于基于T载体的PCR片断克隆。
2)YT Taq 酶可以扩增长度达5kb的DNA片断，zuì长可以扩增长达10kb的DNA片断。通常适合扩增3kb以下的DNA片断。

活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
10×YT Taq Buffer (with Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl, 20mM MgSO4, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。

失活或抑制：酚lǜ仿抽提可以使YT Taq 酶失活。

储存条件：-20℃

注意事项：
1）由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用YT Taq 酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2）YT Taq 酶有3’至5’的外切酶活性，在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此YT Taq 酶一定要zuì后加入，并且要在冰浴上操作。

除了YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer),，我公司还供应以下相关产品：



名称：25mM氯化锰溶液(PCR级MnCl2溶液)
货号：BTN130307
规格：5mL
本产品为专门用于易错PCR的MnCl2水溶液，浓度为25mM，可用于调节MnCl2的zuì佳浓度。由于Mg2+在PCR过程中可以稳定非互补的碱基对，Mn2+能够降低聚合酶对模板的特异性，因而调整两种离子的浓度，可获得不同突变频率的多样性文库。

氯化锰分子量为125.8，CAS号为7773-01-5，水合氯化锰外观为玫瑰色单斜晶体；无水氯化锰外观为桃红色结晶。密度为2.977g/cm3。熔点是650℃。在高于熔点温度下升华。沸点1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：高效cDNA第一链合成试剂盒(微量样本)
货号：WE0128
规格：25次|100次
  本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒使用的逆转录酶是一种利用大肠杆菌工程菌进行重组与表达的全新高效逆转录酶，去除了RNase H活性并增强了其热稳定性，可利用极低量的总RNA或mRNA合成cDNA第一链，起始样本量可低至pg级。UltraRT逆转录酶与RNA亲合能力强，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板，获得高产量的cDNA。
  本试剂盒包含从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的所有试剂，含有Super RT高效逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等，使用简单方便。本系统对后续的PCR以及定量PCR试验兼容性高，适用各种PCR反应的DNA聚合酶。

试剂盒组成：

组份	25次	100次
UltraRT，200 U/μl	25μl	100μl
5×UltraRT Buffer	120μl	500μl
Primer Mix	60μl	240μl
dNTP Mix，2.5 mM Each	120μl	500μl
RNase-Free Water	1ml	1ml

产品特点：
1、高效逆转录：与RNA模板亲和力高，逆转录效率高达90%，可识别pg级别的模板。
2、自由应对复杂模板：即使GC含量高，二级结构复杂的模板，无需高温变性，也可得到良好结果。
3、使用方便：试剂盒包含除RNA模板外的逆转录所需全部试剂。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦*酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。

使用方法：
注意：1ng-5μg总RNA可建立20μl反应体系，如果总RNA量大于5μg，请按比例扩大反应体系。

I逆转录操作步骤：

1、将RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、UltraRT Buffer、UltraRT和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为20μl。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	50 pg-5μg
5×UltraRT Buffer	4μl	1×
UltraRT，200 U/μl	1μl
RNase-Free Water	up to 20μl

注意：
a.若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
b.Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建议 20μl 反应体系Oligo-dT Primer 50 pmol，或Gene Specific Primer 2pmol。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
5、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

II若逆转录效率低，或RNA模板二级结构复杂、GC含量高时，建议采用以下步骤：

1、将RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、UltraRT Buffer、UltraRT和RNase-FreeWater溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配置反应体系，总体积为15μl 。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	50 pg-5μg
RNase-Free Water	up to 15μl

注意： Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。

3、70℃孵育10分钟，迅速冰浴2分钟。
4、短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、继续向以上反应液中加入以下试剂：

试剂	20μl反应体系	终浓度
5×UltraRT Buffer	4μl	1×
UltraRT，200 U/μl	1μl

注意：若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
6、42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
7、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
8、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。