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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
745
- 英文名:
Lambda DNA
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输、-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
λDNA报价是高品质的克隆与表达产品,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多λDNA等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:λDNA报价
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:BTN90407A
英文名:Lambda DNA
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA,是一种常见的DNA底物,分子量为31.5×106Da/48502bp,浓度为200~500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA,是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。
储存溶液:Tris-HCl(pH8.0)10mM;EDTA 1mM
储存条件:低温运输、-20℃保存、有效期一年。
纯度:
1. OD260nm/280nm>1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后,琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃,2小时)后,在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。
关于λDNA报价的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·柱式DNA清除剂
编号:BTN90318
英文名称:Column DNA Scavenger
规格:50次
用Trizol等方法提取的总RNA样品中经常会含有基因组DNA污染,这些污染会影响下游的RT-PCR和Northern杂交等实验。目前最常用的RNase-free DNase处理方法因DNase中所含残留的RNase能破坏RNA完整性而具有很大缺陷。
本产品是非酶DNA清除剂-2的柱式升级产品,可用于细胞总RNA样品中基因组DNA污染的去除。目前最常用的RNase-free DNase处理方法因DNase中所含残留的RNase能破坏RNA完整性而具有很大缺陷。柱式非酶DNA清除剂不但彻底避免了RNase-free DNase的这一缺陷,同时还具有比非酶DNA清除剂-2操作上更快速的特点。
产品特点:
1. 操作更加简单快速,全部操作只需要几分钟。
2. 回收率高达80%以上。
3.高效,能使总RNA中的基因组DNA污染降低到电泳检测不到的水平,而RNA分子完整性不受任何影响。
4. 本身不含RNase污染。
5. 稳定,本产品为非酶产品,可以常温运输和4℃长期保存;而RNase-free DNase的运输和长期保存必须在低温进行。
6. 性价比高,单位成本远低于RNase-free DNase。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 2.5ml |
| 溶液B | 50ml |
| 溶液C | 50ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| RNA洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存。
使用方法:
1. 将50μl总RNA溶液与溶液A按1:1的比例混合,充分震荡半分钟。注意:RNA溶液中盐(如*离子)的浓度不能高于0.2 M,如果RNA溶液的量不足50μl,最好加无RNase水补足到50μl以便后续操作。
2. 加入相当于RNA溶液和溶液A混合液总体积9倍体积的溶液B,颠倒数次充分混匀。注意:溶解溶液B沉淀。溶液B在4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将混合液转移到离心吸附柱中,室温12000rpm离心半分钟,弃穿透液。
4. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
5.一次洗涤一般足够去除杂质。如果有必要,可以再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟并弃穿透液。一般情况,此步可以省略。
6. 加0.7mL溶液C到离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透。
7.室温12000rpm离心半分钟。此步十分重要,否则会影响RNA的使用。
8. 将离心吸附柱转移到一个新的1.5mL离心管中,加入30-50μl RNA洗脱液,室温放置1-2分钟。室温12000rpm离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
疑难解答:
Q:能否用本产品对同一样品进行反复处理?
A:可以。
Q:本产品跟DNA Scavenger-2(BTN70801)有何区别?
A:本产品为柱式升级产品,比DNA Scavenger-2更快速清除RNA样品中的DNA污染。
λDNA报价关键词:Lambda DNA,BTN90407A,λDNA
·终点显色法内毒素定量试剂盒
编号:BTN120415
英文名称:Chromogenic End-point TAL Kit
规格:32次
鲎试剂为鲎科动物东方鲎(TAL)的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有C因子等跟凝血有关成分,当细菌内毒素激活C因子时会,起一系列酶促反应,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的显色基质,使其分解为多肽和黄色的对硝基*(代"*")胺(pNA,λmax=405nm)。在一定时间内,pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关,据此,可以通过测定样品405nm的光吸收来用外标准法定量样品的内毒素浓度。其原理图如下(TAL和图中LAL相同):
本试剂盒就是基于上述原理开发而成,并进行了重大改进,增加了偶氮化试剂染色硝基*(代"*")胺(pNA)的步骤,此步使得反应的最终颜色变成玫瑰红色(λmax = 545nm),避免了深颜色样品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰,结果更加准确可靠。
产品特点:
1.一站式,提供所需的试剂、内毒素对照和无热源的耗材,为用户省去繁琐的准备工作。
2. 灵敏度高,可以对浓度在0.1EU/mL-1EU/mL和在0.01EU/mL -0.1EU/mL两个浓度范围的内毒素样品进行定量。
3. 比经典的pNA法多一步偶氮化染色的步骤,处理样品的范围更广,结果更加稳定可靠。
4.样品中如含有β-葡聚糖,则需选用特异性显色基质鲎试剂盒,因为β-葡聚糖会产生G因子旁路反应,干扰内毒素检测。
5. 若样品含头孢类抗菌素或磺胺制剂,则需要选用不含偶氮化试剂的鲎试剂盒,因为上述成分也能跟本试剂盒中的偶氮染色剂发生偶联反应而干扰偶氮化显色。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 细菌内毒素标准品 15EU | 2支 |
| 鲎试剂 | 2支×1.7mL |
| 显色基质 | 2支×1.7mL |
| 偶氮化试剂1 | 2支×10mL |
| 偶氮化试剂2 | 2支×10mL |
| 偶氮化试剂3 | 2支×10mL |
| HCl(反应终止剂) | 50ml |
| 细菌内毒素检查用水 | 50ml×2瓶 |
| 除热原试管,10×75mm | 10×5支 |
| 除热原吸头,1ml | 10×4支 |
| 除热原吸头,0.2ml | 10×5支 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃避光保存,有效期两年。
使用方法:
一、样品的预处理
1.若样品的本底在545nm的吸光度值大于0.5,必须对样品进行稀释后再检测。
2.若样品颜色较深(例如溶血),或在酸性条件下颜色加深(例如一些组织培养介质),必须设置样品空白管以扣除样品自身的颜色本底。样品空白管不加入鲎试剂,以等体积的细菌内毒素检查用水代替。其余操作同样品管。
3.本检测方法高度灵敏,故接触试剂及样品的所有器皿必须是除热原的。除热原指内毒素浓度小于0.005 EU/ml。玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。实验过程应防止细菌的污染(内毒素即细菌的LPS)。
4.待测样品的pH值应在6.0–8.0之间,若超出此范围,需用自备的除热原的缓冲液、0.1M*氧化*或0.1M盐*(代"酸")调节。
二、试剂准备
5.细菌内毒素标准溶液配制(制备标准曲线用):取细菌内毒素标准品1支,按细菌内毒素标准品使用说明(见附2)稀释为10EU/mL的内毒素溶液,再稀释为1.0EU/mL的内毒素溶液,最后按下表以1.0EU/mL的内毒素溶液为母液,在A-D四个离心管中稀释成0.1、0.25、0.5、1.0 EU/mL的浓度梯度。配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。注意:也可以选择0.01、0.025、0.05、0.1EU/mL的浓度梯度。注意:标准品浓度范围不同,后续显色实验的保温时间也不同。
| 成份 | A管 | B管 | C管 | D管 |
| 细菌内毒素检查用水(mL) | 0 | 0.5 | 0.75 | 0.9 |
| 1EU/ml内毒素溶液(mL) | 1 | 0.5 | 0.25 | 0.1 |
| 内毒素浓度(EU/mL) | 1 | 0.5 | 0.25 | 0.1 |
6.阴性对照用细菌内毒素检查用水。
7.配制鲎试剂、显色基质、偶氮化试剂等试剂的工作液。
(1)鲎试剂:按标签标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中,轻轻振摇使鲎试剂完全溶解,得鲎试剂工作液。注意不要用旋涡混匀剧烈振摇。鲎试剂工作液应在10分钟内用完。
(2)显色基质:按标签标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中,轻轻振摇使显色基质完全溶解,得显色基质工作液。显色基质工作液可在无污染的条件下于4℃贮存8小时以内。
(3)偶氮化试剂1:按标签标示量加反应终止剂(注意:不是细菌内毒素检查用水)于偶氮化试剂1瓶中,得偶氮化试剂1工作液。
(4)偶氮化试剂2:按标签标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂2瓶中,得偶氮化试剂2工作液。
(5)偶氮化试剂3:按标签标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂3瓶中,得偶氮化试剂3工作液。偶氮化试剂工作液可于4℃贮存1周。
三、实验操作
8.取本试剂盒提供的无热原试管6管,按下表操作(每加一个试剂均需要充分混匀,或用移液器轻柔吹打混匀):NC为阴性对照,PC为阳性对照。
| 成份 | NC 1管 | PC 4管 | 样品 1管 |
| 细菌内毒素检查用水(μL) | 100 | - | - |
| 内毒素标准溶液(μL)(4种) | - | 每种分别100 | - |
| 待测样品(μL) | - | - | 100 |
| 鲎试剂工作液(μL) | 100 | 100 | 100 |
| 混匀,37ºC温育T1分钟 | |||
| 显色基质溶液(μL) | 100 | 100 | 100 |
| 混匀,37ºC温育T2分钟 | |||
| 偶氮化试剂1工作液(μL) | 500 | 500 | 500 |
| 偶氮化试剂2工作液(μL) | 500 | 500 | 500 |
| 偶氮化试剂3工作液(μL) | 500 | 500 | 500 |
| 混匀,静置5分钟,于λ545nm测OD值 | |||
特别注意:每个批次的T1和T2不同。对本批次。
四、数据处理
9.建标准曲线:Y=bX + a,其中Y为545nm处吸光值,X为内毒素浓度,b为直线斜率,a为Y轴截距。
10.当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效:
(1)标准曲线的相关系数r≥0.980,
(2)标准曲线最低点的Y值大于阴性对照的Y值,
(3)待测样品平行管的平均值在标准曲线的区间内。
附1:待测样品的干扰实验
当样品中可能存在鲎实验的干扰物质时,须进行干扰实验。待测样品的干扰实验详见《中华人民共和国药典》2010细菌内毒素检查法》的“光度测定法干扰实验”。当鲎试剂、待测样品的来源、配方、生产工艺改变或实验环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时,须进行干扰实验,步骤如下:
1.选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度(设为λm),作为待测样品干扰实验中添加的内毒素浓度,配制含λm内毒素的待测样品阳性对照,测量出该溶液的内毒素浓度,称为Cs;
2.测量出未添加外源内毒素的待测样品溶液内毒素浓度,称为Ct;
3.计算该实验条件下的回收率R=(Cs–Ct)/λm×100%
4.当R在50%~200%之间,则认为在此实验条件下待测样品溶液不存在干扰作用。
5.当R在50%~200%之外,需对待测样品进行系列稀释(稀释倍数不得超过最大有效 稀释倍数MVD)或进行其它处理消除干扰,每一稀释溶液都重复步骤1-3,直到内毒素的回收率R在50%~200%之间。选择回收率R最接近100%的稀释倍数进行内毒素检测。
附2:细菌内毒素标准品使用说明
本品为白色疏松海绵状固体,系参照中国药品生物制品检定所的细菌内毒素工作标准品标定的大肠杆菌内毒素冻干品,供鲎实验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰实验和各种阳性对照。其用法如下:
6.溶解:加入适量的细菌内毒素检查用水(BET水,最大加入量不得超过1mL),复溶后置涡旋混匀器上混匀15 min。
7.稀释:将上述内毒素溶液进一步用细菌内毒素检查用水稀释成各个不同浓度。每次稀释后必须在涡旋混匀器上混匀至少一分钟。每一步的稀释倍数均不得超过10倍。
8.本品为一次性使用。仅供体外鲎实验检测,禁止用于注射、口服等。
9.实验所用的器皿需经过处理,以除去可能存在的外源性内毒素,可以经250℃干烤至少60分钟处理,也可以采用其他确保不干扰细菌内毒素检测的适宜方法处理。实验操作过程中应该防止微生物的污染。
10.稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟,用前需要在涡旋混匀器上剧烈混匀1分钟,放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。
λDNA报价关键词:Lambda DNA,BTN90407A,λDNA
·柱式昆虫DNA提取试剂盒
编号:BTN81101
英文名称:Insect DNA column extraction kit
规格:50次
本试剂盒是专门用于从昆虫、节肢动物、蛔虫、扁形虫和一些富含多糖的动物组织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于去垢剂在适当的离子强度条件下,特异地跟基因组DNA结合形成沉淀,然后在用硅胶膜离心吸附法进行进一步纯化得到DNA。
产品特点:
1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的动物,包括昆虫、节肢动物、蛔虫、扁形虫等。
2. 除新鲜样品外,还适合于各种保存状态的样品,包括冷冻的样品、用乙醇保存的样品和福尔马林保存的样品。
3. 提取到的基因组DNA完整性,长度一般在20-50 Kb。
4. DNA纯净,OD260/280一般都在1.8左右,可直接用于PCR、酶切、杂交等。
5. 操作简单,整个过程约30分钟。
6. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 50ml |
| 溶液C | 50ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
使用方法:
1. 称取0.1-0.3 g昆虫样品转移到塑料研钵中,液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
注意:最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵,因为DNA会吸附在表面,影响得率。
2.在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀,需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。
3. 65℃保温5-30分钟,其间最好吹打混匀2-3次。
4. 12000~15000g室温离心3分钟。
5. 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色混浊状。
7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8. 12000~15000g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
9. 加入0.2mL的*仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。
10. 12000~15000g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物,小心转移上清到新1.5-5mL塑料离心管中。注意:由于下一步要加1.5倍体积的溶液C,所以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀,然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12. 每次转移0.7-0.8mL混合液后,室温放置5-10分钟。
13. 12000~15000g室温1分钟,弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品,可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中,重复第12-14步的操作。
15. 将0.7mL通用洗柱液加入离心柱,室温离心1分钟,弃穿透液。
16.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液,12000~15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
17. 空甩1分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加入30-100μl DNA洗脱液2.0。
19.室温放置5分钟后离心1分钟,管底即为昆虫DNA溶液,可立即使用,也可长期保存在-20℃。
20.可以重复上步一次,以洗脱更多的DNA。
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【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
核苷酸激酶缓冲液中进行。 质量保证: 无核酸内、外切酶污染。每批T4 DNA连接酶均通过模拟克隆实验进行检测,该实验可以检测出待连接DNA末端的任何破坏。结果表明>99.9%的DNA末端未受任何降解。 单位定义(粘性末端活性单位):在20µl连接反应体系、0.12µM (300µg/ml)的5'-末端浓度条件下,16°C反应30分钟,能使50% 的经Hind Ⅲ消化的λDNA片段连接所需的酶量定义为一个NEB单位。 一个粘端连接活性单位=0.015个韦氏(ATP-PP交换)单位
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