一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)北

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)北京价格的品牌：百奥莱博，是优质的核酸扩增(PCR)产品，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)北京价格
规格：100次
产地：国产|进口
英文名：Super TaqMan OneStep RT-qPCR Kit
品牌：百奥莱博
编号：WE0147
  本试剂盒是采用探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效，提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。

试剂盒组成：

 

组份	100次
2×Super TaqMan OneStep Buffer	1.4ml
Super OneStep Enzyme	100μl
RNase-Free Wat er	1ml

注意事项：
1、本试剂盒中试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、本试剂盒中的各试剂应尽量避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-qPCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
5、本试剂盒推荐使用特异性探针，建议采用专业的设计软件进行设计。

使用方法：
以下举例为常规的反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应的改进和优化。(反应液的配置请在冰上进行)

1、将RNA模板、引物、2×Super TaqMan OneStep Buffer、Super OneStep Enzyme和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系：
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×Super TaqMan OneStep Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Probe，10μM	0.5μl	0.2μM
Super OneStep Enzyme	1.0μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常RNA模板的量以10 pg-100ng为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。

3、混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-PCR反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
逆转录	45℃	20 min
PCR预变性	95℃	2-5 min
变性	95℃	15 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	30-45 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、2-5 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

我公司的一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)北京价格，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
BTN131156 山羊抗兔IgG,异硫*酸荧光素标记 Goat Anti-Rabbit IgG ,FITC Conjugate
BTN130996 Cy5-dCTP溶液 Cy5-dCTP Solution
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·抗β-Actin单克隆抗体
编号：WE0354
英文名称：Anti β-Actin Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
β-Actin是是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。具有收缩功能，分布广泛，分子量为43 kDa，具有高度保守性，在细胞中的表达相对稳定，因此它常被用于校正系统的内参。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG2b
免疫原：β-Actin N末端多肽
应用范围：WB(1：500-5000)
应用种属：人，大鼠，小鼠，兔，猪，鸡，绵羊

·磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
编号：WE0206
英文名称：MagBeads Gel DNA Extraction Kit
规格：96次
  本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的用于琼脂糖凝胶DNA回收的方法。它可以从用TAE或TBE制成的琼脂糖凝胶中回收100 bp以上的DNA片段，回收效率高达80%。溶胶液将琼脂糖胶溶解后，磁珠选择性的吸附DNA片段。经漂洗后，洗脱得到的DNA纯度良好，可用于测序、酶切、PCR、克隆等下游实验。

试剂盒组成：

组份	96次
Buffer MG	90ml
Buffer GW1	52ml
Buffer GW2	50ml
Buffer EB	30ml
Magbeads PN	2×1ml

自备仪器及试剂：
1、手动单管提取：恒温混匀仪；2/15ml磁力架；异丙醇、无水乙醇
2、手动96孔深孔板提取：恒温混匀仪；废液抽吸系统；手动连续分液器；电动连续分液器；手动连续分液器分液管(25ml)；96孔板磁力架；异丙醇；无水乙醇

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
3、Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻和离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
4、Magbeads使用前需涡旋震荡20秒使其充分混匀。
5、如Buffer MG中出现沉淀，请在50℃水浴锅中重新溶解，摇匀后即可使用。
6、首次使用前应按试剂瓶标签在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
7、实验过程中，磁珠在溶液中的充分混匀对于提取的得率与纯度都有很大的影响。实验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪震荡混匀效果有一定差异，实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象，请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率。

操作步骤：

一、手动单管操作：
1、在长波紫外灯照射下将目的条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量去除多余的琼脂糖凝胶)，称重后将其放入干净的1.5ml离心管中。
2、向离心管中加入3倍胶体积的Buffer MG(如果胶块重0.1 g，其体积为100μl)后，将其放入50℃的水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡5秒钟。
3、将离心管从水浴锅中取出，检测胶块是否完全融化以及溶液是否由黄色变成紫色(如胶块未完全溶解，将离心管放回水浴锅中继续孵育；如溶液颜色由黄色变成紫色，向离心管中加入10μl 3M的醋酸*溶液)。短暂离心后，将离心管室温放置5分钟。
4、向离心管中加入20μl充分混匀的Magbeads，涡旋震荡5秒钟后将其放入25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟或连续颠倒混匀10分钟。
5、将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
6、将离心管从磁力架上取下，加入750μl Buffer GW1后涡旋点震1分钟或涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
7、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer GW2(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
8、重复步骤7。
9、保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净。
注意：如果离心管侧壁上有液珠，可向离心管中加入750μl无水乙醇。盖盖后颠倒离心管(保持离心管固定于磁力架上)，之后彻底弃去无水乙醇。
10、将离心管从磁力架上取下，加入30-100μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠完全悬浮于洗脱液中后将其放于50℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟，或将离心管放于50℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
11、将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

二、手动96孔板操作：
1、在长波紫外灯照射下将目的条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量去除多余的琼脂糖凝胶)，称重后将胶块放入2ml 96孔深孔板(简称“深孔板”)中并记录每孔中的样品名称。
2、向深孔板中加入3倍胶块体积的Buffer MG(如果胶块重0.1 g，其体积为100μl)，盖盖后将96孔板放入50℃的水浴锅中孵育10分钟，期间将深孔板放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2次，每次10秒钟。
3、将深孔板从水浴锅中取出放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟，用8通道移液器向深孔板中加入20μl充分混匀的Magbeads。之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
4、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
注意：用废液抽吸系统去除溶液时需将真空泵调节至较小的负压力值，使溶液以一个合适的速度被吸走,速度过快会造成磁珠的丢失。
5．用手动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
6、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
7、用手动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
8、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
9、重复步骤7-8。
10、用手动连续分液器或8通道移液器向96孔深孔板中加入500μl无水乙醇，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀1分钟。
11、将板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
12、保持深孔板固定于96孔板磁力架上，将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置2分钟。之后将深孔板从96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒温混匀仪上静置5分钟。
13、用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板加入50-100μl Buffer EB，之后将深孔板放于100℃(因该恒温混匀仪为悬空加热，洗脱液实际温度在50-60℃之间)、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10分钟。
14、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟，用8通道移液器溶液转移至96孔PCR板中盖盖后-20℃保存备用。

储存条件：室温(15～30℃)


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·BaldStar Taq DNA Polymerase
编号：WE0111
英文名称：BaldStar Taq DNA Polymerase
规格：500U|2500U
  BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效的Taq DNA Polymerase，在常温下酶的活性被完全封闭，使得该酶在低温或常温下没有活性，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的缓冲体系使酶的应用更为广泛，使GC含量高、二级结构复杂以及低拷贝的模板，均能高效扩增。用本品进行PCR扩增，PCR产物3"末端含有A，可直接用于T/A 克隆。本产品特异性强，PCR扩增后无需胶回收去除杂带，可直接用于下游克隆或芯片杂交等实验。主要应用于常规的PCR、RT-PCR、Real-time PCR、多重PCR、基因芯片分析和SNP检测，特别适用于对特异性要求较高的PCR反应。

产品组成：

组份	500 U	2500U
BaldStar DNA Polymerase，5 U/μl	100μl	5×100μl
5×BaldStar PCR Buffer	1.9ml	5×1.9ml

注意：本产品的5×BaldStar Taq PCR Buffer中含有8.5mM*离子。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、SDS-PAGE检测纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残留DNA；
4、能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
5×BaldStar PCR Buffer	10μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
BaldStar DNA Polymerase，5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度，请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	30 s	30-40个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30-60 s，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的BaldStar Taq DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司生产供应销*(代"售")的核酸扩增(PCR)正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)北京价格。