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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0733
- 2025年11月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Instant Fluorescent PCR Kit
- 库存：
950
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是基于荧光染料检测的即用型PCR试剂盒，可以对基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列进行实时定量PCR分析（quantitativePCR、qPCR）。本产品含有经过优化的缓冲液组分、优化的TaqDNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、SYBRGreenI和稳定剂等成分。本产品中优化的TaqDNAPolymerase高温加热前，抗Taq单克隆抗体与Taq结合，抑制Taq聚合酶活性，从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板DNA之间的非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。而且抗体在PCR反应的预变性步骤中能完全失活，不会阻碍之后TaqDNA聚合酶的活性，大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。
1.方便，用户只需准备模板和引物既可以进行实时定量PCR实验。
2.使用抗Taq抗体封闭的优化的TaqDNA聚合酶，可抑制低温条件下的非特异性扩增。
3.使用第三代饱和型荧光染料，信号强，不会抑制PCR反应。
4.快捷，即用型的预配液使加样操作步骤大大简化，避免了交叉污染，降低实验误差。
5.各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能检测到浓度为50拷贝/mL的靶分子。
Real-Time PCR稀释液运输及保存：
低温运输，-20℃保存,保存期限为6个月。
自备试剂：DNA模板、引物、超纯水。
Real-Time PCR稀释液使用方法
1.以20uL的qPCR反应体系为例：在一干净的PCR管中，加入下列成分:
Real-Time PCR稀释液放入荧光PCR仪中进行扩增,并在退火或延长步骤中记录荧光信号。
注意：
a)通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考；通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ngcDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
b)ROX校正染料：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI7700和7900，ROX的最佳浓度为1×（即在每20uL反应体系中加2uL10×ROX）。对ABI7500，ROX的最佳浓度为0.05-0.1×（每20uL反应体系加0.1-0.2uL10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入1-2uL1×ROX）。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“PassiveReferenceDye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。对于iCyclerIQ，MJOpticon，MJChromo4，MX3000，MX4000,RotorGene3000，RotorGene6000和LightCycler480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。
2.循环步骤：根据扩增子的性质和仪器性能，从以下三个过程中任选一个进行扩增。
Real-Time PCR稀释液A：两步快速循环法：适用于引物Tm值设计为60℃的反应
注意：本产品所采用的酶在预变性95℃、2-5min条件下实现酶的活化。退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可适当提高退火温度。
B：三步快速循环法：
适用于延伸步骤温度高于退火步骤的PCR（长引物PCR）
Real-Time PCR稀释液注意：退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。延伸温度：延伸温度设为72℃通常可以提高扩增效率。但是，对于AT含量大于70%的扩增子来说，延伸温度设为60℃为宜。
C：通用循环法：
这种循环方法适用于几乎所有的荧光PCR仪，也适用于用快速循环法不能扩增的模版。
3.按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。
Real-Time PCR稀释液注意事项
1.如果使用iCycler，可以不加入FAM。
2.如果使用RocheLightCycler的玻璃毛细管进行PCR，需加入终浓度为0.5mg/mL的自备BSA。
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Taq Activities 5’-Nuclease Activity Does Not Harm Normal PCR
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