TOP10化学感受态细胞厂商

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

TOP10化学感受态细胞厂商由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多TOP10化学感受态细胞等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：TOP10化学感受态细胞厂商
英文名：TOP10 Chemically Competent Cell
规格：100μl×10管
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：SY0011
本品是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本品使用pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg，广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

TOP10感受态细胞基因型：F-mcrA △(mrr-hsd RMS-mcr BC) 80lacZ△M15 △lac X74 recA1 ara△139 △(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (Strr) endA1 nupG

储存条件：-80℃
组份：
TOP10感受态细胞 100μl×10
pUC19(0.1 ng/μl) 5μl

注意事项
1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，最低化实验可能遇到的风险。

使用方法
1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
【注】：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用，应注意所用的DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
2）向100 μl感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30min。
3）将离心管置于42℃水浴中放置60-90 s，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3min，该过程不要摇动离心管。
4）向离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min（150 rpm）， 目的是促使菌体复苏，抗性基因表达。
5）将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃培养12-16 h。
【注】：涂布菌液多少可根据转化DNA量来调整。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，重新悬浮菌体后将其涂布在一个平板上。剩余菌液可置于4℃保存，一周之内可重新涂板。

我公司的TOP10化学感受态细胞厂商，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·即用型腔肠素h
编号：SY0236
英文名称：Ready To Use Coelenterazine h
规格：10 vials
本品是即用的腔肠素h，特别设计用于体内成像研究。通过最小化产品成分的变化，最小化冻融次数和严格控制不同批次的产品，确保客户得到高重复性的结果。产品的优点在于：1）溶于丙二醇和柠檬酸的腔肠素h，稳定性高，即开即用，不用考虑粉末配置成液体的稳定性问题。2）预制配方，不同批次间严格控制，特别设计用于体内研究；3）即用型产品通过最小化预成像准备步骤，减少时间和精力；4）经IVIS成像系统验证，控制体内成像质量；

本包装含有10瓶无菌腔肠素h即用型溶液，每瓶含1.2ml浓度为150 μg/mL的Coelenterazine h。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当*离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内*离子水平。与常规的荧光*离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点：
1）能检测较大范围的*浓度 – 从0.1 μM至 >100μM；
2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光*离子指示剂；虽然信号比使用荧光*离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。
3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的*离子监测。



图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物。
腔肠素h（Coelenterazineh）是海肾荧光素酶（Rluc）和Gaussia荧光素酶（Gluc）等多种荧光素酶的作用底物，其发光强度比天然腔肠素高10倍以上，适用于报告基因分析。也是水母发光蛋白的辅助因子，可用于检测活细胞中*离子浓度。

运输和保存方法：冰袋运输。≤-20℃避光保存，最好放到-70℃长期避光保存。


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·ARE-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0106
英文名称：ARE luciferase reporter plasmid
规格：1μg
ARE荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（ARE luciferase reporter plasimd）是用于检测ARE转录活性水平为目的的报告基因。ARE(antioxidant response element) 与Nrf2和NRF1转录因子结合，调节参与保护细胞免受氧化损伤的相关基因。

ARE报告基因主要应用于检测细胞的抗氧化水平或氧化应激状态、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMARE-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个ARE结合位点，可以高灵敏度地检测ARE的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得ARE报告基因更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMARE-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。

·1ml重力层析空柱
编号：SY0404
英文名称：Gravity Chromatography Columns
规格：1套
我公司提供的重力层析空柱适用于多种亲和层析介质的装填，以便于后续相应蛋白的纯化。本品为1ml 重力层析空柱，总装填体积1ml。

储存条件：室温

·蛋白A纯化预装柱
编号：SY0468
英文名称：Protein A 4FF Chromatography Column, 1ML
规格：1ml
本品Protein A 4FF Chromatography Column，1ml是一种装填了Protein A Agarose Resin 4FF的中压预装柱，规格1ml，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。

天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，结合大多数哺乳动物的IgG，可用于多种抗体（单抗和多抗）的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上，ProteinA 和Protein G结合性能不太一样（详见附录1）。

本品使用的是基因改造后的蛋白A，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合，Protein A Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，重组Protein A为配基，具有很高的物理化学稳定性，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化，适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。

基质（Matrix）：高度交联的4%琼脂糖微球
配体（Ligand）：重组蛋白A
孔径（Bead size）：45-165µm
最大流速（Flowmax）：0.3MPa,3bar
储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS
载量（Capacity）：＞40mg human IgG/ml 基质
pH范围：3-12
储存条件：4℃，有效期两年


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·AARE-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0092
英文名称：AARE luciferase reporter plasmid
规格：1μg
AARE荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（AARE luciferase reporter plasimd）是用于检测AARE转录活性水平为目的的报告基因。随着*基酸的消耗，GCN2被激活并且使elF2a磷酸化，这将使ATF的翻译增加，激活的ATF4将结合AARE调控目的基因的表达。

AARE报告基因主要检测细胞中*基酸受体的活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMAARE-Lu是吉我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个AARE结合位点，可以高灵敏度地检测ATF4/3/2的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得AARE报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMAARE-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。

我公司生产供应销*(代"售")的克隆与表达正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购TOP10化学感受态细胞厂商。