大肠杆菌TG1电击感受态细胞优惠促销

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大肠杆菌TG1电击感受态细胞优惠促销由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多大肠杆菌TG1电击感受态细胞等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：大肠杆菌TG1电击感受态细胞优惠促销
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN160801
规格：50μL×5
英文名：E.coli TG1 Electroporation-Competent Cell
 TG1电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。TG1 来源于E. coli K-12菌株，是目前生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株，在平板上37℃，7小时可见克隆，是主要的噬菌体展示用菌株，同时也可用于普通质粒的构建，lacIqZΔM15的存在使其可以用于蓝白斑筛选等实验；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶。TG1电击感受态细胞适用于噬菌体展示文库的构建，经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>0.5×1010cfu/μg DNA。

菌株基因型：[F´ traD36 proAB lacIqZΔM15] supE thi-1 Δ(lac-proAB)Δ(mcrB-hsdSM)5(rK–mK–)。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC培养基等。

使用方法：
1. 将0.1 cm的电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的TG1电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。(注：对于质粒，测定转化效率使用1μl 10 pg/μL的对照质粒pUC19；对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10mM Tris HCl，pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100 ng/μL，体积不超过5μl/50μl感受态。)
3. 用 200μl 枪头(用刀切除0.5 cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5. 2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入1mL 不含抗生素的无菌SOC培养基(室温)，用1mL 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50mL离心管(BD Falcon 50mL 锥形离心管等)，向离心管中补加SOC培养基至10mL。倾斜45 度放入摇床，37℃，225 rpm 复苏60分钟。
6. 5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200μl 涂布到含相应抗生素的SOC 平板上(因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。

注意事项：
1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10mM Tris HCl,pH7.5; 1mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μL。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

除大肠杆菌TG1电击感受态细胞优惠促销外，我公司正在打折促销以下产品：

·大肠杆菌TB1感受态细胞
编号：BTN140645
英文名称：E.coli TB1 Rosetta Competent Cell
规格：10*100μl
 本感受态细胞来源于JM 83，是JM 83 hsdR型，只含有大肠杆菌RNA polymerase，缺少BL21(DE3)菌株的T7 RNA polymerase，适合NEB公司的pMAL 系列质粒原核蛋白表达(The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于pET 系列质粒的表达，具有链霉素抗性。TB1感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。

菌株基因型：F– ara Δ(lac-proAB)rpsL(Strr)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中并静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入700μl 无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
6. 将平板倒置于37℃培养箱中培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
4. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。


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Western封闭液II（奶粉） 100ml
BL0639 羧甲基-琼脂糖凝胶CL-6B CM Sepharose CL-6B
硝*吡*(代"啶") Clarithromycin 21829-25-4
RealSafe核酸凝胶染色剂 1套
糖蛋白富集试剂盒 Glycoprotein enrichment Kit  50T|100T
BL0766 AMV Reverse Transcriptase  反转录酶
F030628 FITC标记兔抗猫IgG抗体 Rabbit Anti-Cat IgG*FITC
BTN111109 DOP-PCR试剂盒 DOP-PCR Kit
松香酸 Gelatin 514-10-3
PY04-061  抗生素混合液  1ml/支×10支  每支添加于100mlCamp-BAP琼脂培养基基础中，用于弯曲杆菌选择性分离培养
F030425 胶体金标记兔抗豚鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Guinea Pig IgG*GOLD
ARB12625 大鼠维生素D2(VD2)酶标法分析 Rat vitamin d2,vd2 ELISA KIT
BL0864 羊抗人C3免疫血清 0.5ml
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·DNA探针变性液
编号：BTN131208
英文名称：DNA Probe Denaturation Solution
规格：10mL
杂交反应进行时，探针和靶核酸都必须是单链的。如果用双链DNA探针进行杂交(包括检测RNA时)，双链DNA探针在杂交前必须进行变性。本产品就是即用型的DNA探针变性液，专门针对DNA探针在杂交前进行变性处理。

产品特点：
1. 即开即用。
2. 使用方便快捷，可用于核酸杂交。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

一、根据探针和靶分子的不同，分别按下面不同情况计算杂交分子的Tm 值
1. 对 DNA-DNA杂交，其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
说明：L是探针或靶分子的长度(用两者中最短的一个)
 GC%是探针或靶分子中的GC 百分比(用两者中最短的一个)
 Na+浓度是超级杂交液中Na+的浓度，为0.75 M，16.6×log10[Na+]=(-2.07)
2. 对 DNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 对 RNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 对 Oligo探针杂交，Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。

二、确定最佳杂交温度(预杂交温度跟杂交温度应该一样)
1. 对于大于200bp的DNA-DNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃，一般选择68℃。
2. 对 RNA-RNA或DNA-RNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃。
 如果这样计算出的杂交温度很高(如高于70℃)，则RNA 容易降解，所以最好选用含甲酰胺的超级杂交液(超级杂交液B型)，以便能在42℃完成杂交。
3. 对 Oligo探针的杂交，最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo 较短，更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等)，所以最佳温度需要适度摸索和优化。

三、确定洗膜温度
一般使用0.1×SSC做洗膜液，在此条件下的最佳洗膜温度比Tm低5-12℃，一般情况下可以在55℃进行洗膜。Oligo探针可以室温洗膜。

四、预杂交步骤
 预杂交就是用不含探针的超级杂交液跟印迹膜进行孵育，其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭，否则这些位点会吸附标记的探针，造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中，使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋最好预先封口，再剪掉一角，留一个小口)，按每平方厘米印迹膜加0.2mL超级杂交液的比例沿小口加入超级杂交液，然后用塑料封口机将口封牢。
3. 将此塑料袋浸没入温度设定在最佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中，保温1-2小时，延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中，使超级杂交液与印迹膜充分接触。

五、杂交步骤
1. 如果标记的探针是双链核酸，则需经变性处理。具体操作是：根据探针浓度和杂交所需探针的量计算出所需的探针体积，取出所需体积的探针到一干净的硅化的塑料离心管中，加入等体积的本产品，吹打混匀后室温放置5分钟变性后，将探针样品放入冰浴中冷却，加入0.05倍体积的自备的1 M的Tris-Cl溶液(pH7.2)以及等体积的自备的0.4 M的HCl溶液。
将探针样品保存在冰浴中直至需要。如果是单链DNA或RNA探针，则不需变性，直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口，加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率而定，一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因，探针的加入量应加大，而对于检测克隆的基因片段，则探针的量可减少。如果是放射性探针，应将此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3.在选定的杂交温度下继续保温，时间一般为6-12小时。

六、洗膜步骤。
 注意在下面的所有操作过程中，一定不要使印迹膜干燥。此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低，热稳定性较差，在一定的温度和较低的离子强度下，即可洗掉。
1.杂交完毕，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含探针的杂交液。此含探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2. 剪开杂交袋，用镊子取出印迹膜，浸没于大量的2×SSC(含0.5 % SDS)溶液中，室温下振荡漂洗15分钟。
3. 重复上步操作一次。
4. 将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中，在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5. 重复上步操作一次。如果是同位素标记探针，则需要重复至用盖革计数器在无核酸区域检测不出放射信号为止。
6. 将印迹膜转移到滤纸上，吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。

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