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        计算感受态细胞转化率公式中的稀释倍数

        互联网

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        转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子,根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率,公式如下:

        转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积

        转化频率(转化子数/每ug质粒DNA)=转化子总数/质粒DNA加入量(ug)

        下面以大肠杆菌TG1电转感受态为例给你演示一下:

        第一天,上午取大肠杆菌TG1菌液划线平板(一般要48小时以上才能长出单克隆)。

        第三天,在长有单克隆的平板上挑一个生长状态好的单克隆接到4ML新鲜培养基,过夜培养。

        第四天,如你说的,按1:100扩大培养;OD达到0.5~0.6开始制备感受态细胞。

        制备好的感受态细胞分装到1.5 EP管中,一般为100 μl 每管

        感受态效价的测定:

        转0.1 ng 标准质粒到100 ul 的感受态细胞中,1.5 KV 电压电击,37度培养1小时,稀释涂布所谓的“稀释倍数”是指这的稀释一般情况下TG1电转感受态的效价(即转化频率)在108~109所以反推预测,我们一般会稀释10-2~10-3梯度来涂布。如果涂布50 ul,假设在10-2板上N个菌落,

        套公式:

        转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积

        转化子总数=N×102×100/50=2N×102

        转化频率(转化子数/每ug质粒DNA)=转化子总数/质粒DNA加入量(ug)

        转化频率=2N×102/10-4(0.1 ng=10-4 ug)=2N×10

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