BTN140386型酿酒酵母AH109化学感受态细胞(国产,

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名称：BTN140386型酿酒酵母AH109化学感受态细胞(国产,进口)
英文名：E.coli AH109 Chemical Competent Cell
规格：10×100μL
品牌：百奥莱博
编号：BTN140386
 AH109菌株来源于PJ69-2A 酵母菌株，将lacZ 报告基因引入PJ69-2A 诞生了AH109，此菌株是Clontech公司开发的GAL4 系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187 通过mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker 为: trp1，leu2，报告基因为：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1。AH109-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1～174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C端768 ～881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。

 GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N 端1 ～174 位*基酸区段的DNA 结合域(DNA-BD)和位于C 端768 ～881位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD 能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD 单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD 不与AD 结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD 融合，形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和prey 融合蛋白(prey-AD)，如果 bait和prey发生相互作用，就会促使 BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。AH109 有四个报告基因：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子(GAL1，GAL2，MEL1)启动，这三种启动子只有GAL4 识别的17bp 核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。本产品经特殊工艺制作而成，经PGADT7质粒检测转化效率为＞104cfu/μg DNA。

菌株基因型：MATa，trp1-901，leu2-3，112，ura3-52，his3-200，gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3,MEL1 GAL2UAS-GAL2TATA-ADE2,URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ

产品组成：

 

成分	规格
AH109感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/LiAc 4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、 SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入2-5μg预冷的目的质粒、10μLCarrier DNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)、500μl PEG/LiAc，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μl ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取50μl ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P - ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
4.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
5. 同时转化2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

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333-93-7 1.4Diaminobutane ACROS 5g(5.7ml)腐胺
N96 植物基因组DNA提取试剂盒 
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杆菌肽 BAA 1405-87-4
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9012-90-2 Taq DNA 聚合酶
13755-38-9 硝普* Sodium Nitroprusside
RNA酶抑制剂 2000U|5×2000U
BTN80912 大提柱式质粒 DNAOUT Maxi Column Plasmid DNAOUT
BL0633 SP-琼脂糖凝胶HP SP Sepharose HP
ARB11938 大鼠5核苷酸酶(5-NT)血清中含量检测 Rat 5-nucleotidase,5-nt ELISA KIT
亚甲基蓝染色液  0.1%|0.2%|0.5%|1% 100ml
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曲拉通x-405 Tetracycline HC1 92046-34-9
ARB10346 人反三碘甲状腺原*酸(rT3)酶联免疫定量检测 Human reversetri-iodothyronine,rt3 ELISA KIT
L-甘-酪二肽 N,N-Dimethylglycine hydrochloride 658-79-7
一氧化*(代"氮")合酶染色液   2×10ml|2×20ml
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戊二醛固定液(4%,电镜专用)   100ml|500ml
N-乙酰-L-*丙*酸 Chloramphenicol 2018-61-3
F020227 山羊抗人IgG抗体 Goat Anti-Human IgG
F030640 FITC标记兔抗驴IgG抗体 Polyclonal Rabbit Anti-Donkey IgG*FITC
PY02-391  RS琼脂  250克  
ARB13576 兔子白介素4(IL-4)ELISA代测服务 Rabbit interleukin 4,IL-4 ELISA KIT
ARB11591 人黄体生成素释放激素(LHRH)检测服务 Human luteinizing hormone-releasing hormone,lhrh ELISA KIT
ARB13883 猪主要组织相容性复合体I类(MHCI/SLAI)elisa检测 Swine major Histocomp*(代"a")tibility complexi,mhci/slai ELISA KIT
ARB12611 大鼠羟脯*酸(Hyp)血清中含量检测 Rat hydroxyproline,hyp ELISA KIT
*麝香草酚蓝指示剂   100ml
BTN131192 超敏化学发光(AP)检测试剂盒 Ultrasensitive ECL Kit
维生素D3 Naphthol AS-TR acetate 67-97-0
BTN81104 超快核酸银染试剂盒 Rapid Silver Stain for Nucleic Acid
PY04-030  多粘菌素(III)  1mg /支×10支  每支添加于100 ml PALCAM培养基基础中，用于李斯特氏菌的选择性分离培养
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·PLPD固定液
编号：BTN131290
英文名称：PLPD Fixative Solution
规格：250mL
本产品由PLP固定液和重铬酸*混合而得，PLPD固定液又称过碘酸*-赖*酸-多聚甲醛-重铬酸*固定液，尤其适用于免疫电镜中保护抗原性和超微结构。4℃条件下固定时间36-54小时。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期半年。

·一站式乙酸-尿素PAGE电泳套装
编号：BTN130881
英文名称：One-Stop Acetic Acid-Urea PAGE Pack
规格：30次
本产品由PLP固定液和重铬酸*混合而得，PLPD固定液又称过碘酸*-赖*酸-多聚甲醛-重铬酸*固定液，尤其适用于免疫电镜中保护抗原性和超微结构。4℃条件下固定时间36-54小时。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期半年。

·即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子，有MCS)
编号：BTN120514
英文名称：Instant Blue-White Vector T，Type D
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段，其两个末端的5´都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有多克隆(CMS)位点，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4. 来源于pUC19质粒，两侧无RNA聚合酶启动子。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α 肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

组分	规格
即用型蓝白T载体D型(10ng/μL)	60μl
阳性对照(35ng/μl)	30μl

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

质粒图谱

多克隆位点

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