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- 技术资料
- 保存条件:
-83~-75℃保存6个月。
- 英文名:
TSsetta(DE3)Chemically Competent Cell
- 库存:
充足
- 供应商:
北京擎科生物科技股份有限公司
- 规格:
10×100 µL
高效表达感受态,转化效率>108 cfu/μg,含有稀有密码子tRNA,可表达含有稀有密码子的基因
【产品简介】
TSsetta(DE3)是用于高效表达含有(但不限于)稀有密码子的真核基因化学感受态细胞,包含有低拷贝的氯霉素质粒pRARE(可与pET28a、pGEX4T-2等常见质粒兼容),该质粒补充了大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA,避免了对基因种包含的稀有密码子优化,降低了实验难度。结合本公司独创的缓冲体系及制备工艺,使用pUC19质粒DNA检测,转化效率可达1×108 cfu/µg。
【产品特点】
蛋白表达能力优异;
转化效率大于 1×108cfu/µg;
稀有密码子表达。
【基因型】
F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm(DE3) pRARE(argU,argW,ilex,glyT,leuW,proL)( Camr )
【产品组成及保存】
-83~-78℃保存6个月。
| 组分 | 规格 |
| TSsetta(DE3)Chemically Competent Cel | 10 ×100 µL |
| pUC19(control vector) | 10 µL(10 pg/µL) |
【操作流程】
加入目的 DNA(质粒或连接产物),轻轻混匀后进行如下步骤:
【注意事项】
感受态细胞在冰上融化;
实验操作轻柔;
请勿反复冻融;
用IPTG进行诱导的浓度在0.1~2 mM均可。
【问题讨论】
Q1:稀有密码子的存在对原核表达有什么影响?
A1:不同物种有不同的密码子偏爱性,如果外源蛋白中含大量大肠杆菌的稀有密码子,特别当这些稀有密码子呈连续分布的时候,就会造成蛋白表达量极低,或者翻译提前终止。
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文献和实验1. 一定要用干冰运输。 3 2. 不立即使用的感受态细胞请在-80℃下保存(融化后的感受态细胞不能再冻结保存)。 3. 转化时请使用传热性能较好的试管。一般的1.5 ml微型离心管也可使用,但转化效率会有所下降(此时请在使用方法5.的42℃下放置60秒)。 4. 对100 μl的感受态细胞,用于转化的质粒DNA量请控制在10 ng以下,并保证DNA溶液的体积在20 μl以下。否则会影响转化效率。
,产生1000个菌落。转化率为: 产生菌落的总数/铺板DNA的总量。 铺板DNA的总量是转化反应所用的量除以稀释倍数。具体而言转化用10ng DNA,用SOC稀释到1000u后含10 ng DNA,用1/10铺板,共用1 ng DNA。转化率为:1000克隆X103 ng /铺板1 ng DNA ug=106cfu/ ug转化pGEM-T应用108cfu/ ug感受态细胞,如没有菌落或少有菌落,感受态细胞的转化率太低。 C)如用pGEM-T正对照,或PCR产物,产生>20-40蓝斑(用指定
合适的摩尔数比。 8.用高效的感受态细胞(转化效率≥1×108 cfu/μg pUC19),这样才可能得到比较理想的阳性克隆。 9. 试剂 盒配有Control DNA。通过对照实验判断 试剂 盒的保存效果。 【实验












