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3个月
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MiaoLingBio
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1000
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淼灵生物
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1管
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文献和实验-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
质粒转化人巴斯德毕赤酵母菌株(如GS1 15，KM71)一将转化物接种HIS4缺陷平板进行第一轮筛选一用不同浓度的G418平板进行第二轮筛选一挑选10~20个克隆进行小规模诱导培养，鉴定外源基因的表达量一挑选高水平表达菌株进行大规模诱导培养以制备外源基因的表达蛋白质。 4、在酵母表达载体中高效表达外源基因的策略 （1）增加整合在酵母染色体上的目的基因剂量 适当增加目的基因整合到酵母染色体上的拷贝数(即基因剂量)是有效提高外源基因表达量的基本策略。Clare等在利用毕赤酵母表达破伤风毒素片段时发现
我先说我有的质粒和菌株：PPIC9K，PPIC9，PPICZahphaA，B，C 以及一个改造的PPIC9K载体，EcoRI和BamHI双酶切，C末端引入了一个6histag 菌株：GS115，KM71，X33，以及十几个空载体对照菌株 我的酵母表达Protocol： >10ug质粒用Sal线性化，加1/10体积的3M NaAC PH5.2和3倍体积的乙醇沉淀 70％乙醇洗一遍，20ul ddH2O重溶 按照公司手册做电转化感受态，一般OD
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