- 询价
- 免疫荧光实验
- 全国
- 2025年07月13日
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
相关阅读
源叶生物 十万种现货试剂速发，品质稳、品类全，实验不再等！Takara 秋促来袭，提取+反转录+定量套装仅 1200 元abinScience 体内级抗体 全年锁价 低至 ￥1200阿拉丁 22万+ 科研级产品现货速发，品质严控、科研无忧- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
天津津科生物科技有限责任公司
- 服务名称：
免疫荧光实验
免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。
（二）仪器设备
1）湿盒；
2）恒温摇床；
3）荧光显微镜；
4）器械：盖玻片（处理：先下洗液，然后自来水冲洗，纯水冲洗，ddH2O冲洗，烘箱烘干，放入75％的酒精中，使用前挥干酒精）、载玻片、镊子
（三）试剂
1）PBS；
2）4％多聚甲醛:PBS配(NaOH调pH值到7.2-7.4）,固定细胞；
3）0.2％Triton X－100: PBS配；
4）3%BSA: PBS配；
5）一抗、二抗：均用PBS配；
6）抗淬灭封片剂：试剂公司定购，直接滴加即可
（四）操作流程及注意事项
1、贴壁细胞
1） 取出六孔板中已贴壁好的细胞或者加过药的细胞爬片PBS洗三遍，每遍3～5min，每孔2mL。注意：加PBS冲洗不要将细胞冲下来，下面的每一步都应注意这点。此步的时间和次数可以适当减少。
2）4％多聚甲醛室温固定20～40分钟，PBS洗三遍，每遍3～5min，每孔2mL。注意：多聚甲醛固定的时间由细胞状态而定，细胞状态较差，控制固定时间在30min以内，如果状态比较好，可以延长5～10min。
3）0.2％Triton X－100， 4℃（放于冰箱中），透化20～30分钟，PBS洗三遍，每 遍3～5min，每孔2mL。注意：细胞状态较差时，控制时间在15～20左右
4）3%BSA室温封闭1h
5）将盖玻片从6孔板中用针或者镊子挑出，放于载玻片上，有细胞的一面朝上，滴 加一抗100µL～200µL， 4℃湿盒内过夜，也可37℃孵育1小时，前者效果好。注意：有细胞的一面朝上，夹盖玻片的时候小心，不要夹断玻片
6）将盖玻片放回6孔板中，PBS洗三遍，每遍3－5min，每孔2mL。注意：此步的清洗很重要，可以延长清洗时间和清洗次数，可以保证本底比较干净。
7）将盖玻片从6孔板中用针或者镊子挑出，放于载玻片上，有细胞的一面朝上，滴加二抗100µL～200µL，二抗室温1小时（避光），PBS洗三遍，每遍3－5min，每孔2mL。
8）蒸馏水洗掉PBS，抗淬灭封片剂封片，-70℃避光保存。 注意：①还是染完之后没有封片前直接照效果好一些，因为有的时候可能封片会 出现问题，再想照反而没有了，另外不要拖太长时间，荧光会淬灭的。②荧光的 片子一定要避光保存，保存的好的话，过一段时间仍然能照出很好的片子。
2、悬浮细胞
1）1000rpm×5min离心收集细胞，PBS洗一次，离心收集
2）-20℃预冷的甲醇100～150µL加入到细胞中，吹匀后快速滴加到6孔板中的盖玻片上，-20℃固定20～30min后，取出挥干甲醇（可以放在空调下吹，或者用电风机吹），尽量保证吹干，但是细胞又都在玻片上。
3）下面的操作同贴壁细胞的3～8步，但是悬浮细胞比贴壁细胞更易吹掉，所以操作时更要小心，尽量保证细胞在玻片上。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验固定和透化 在培养板中将已爬好细胞的盖玻片用 1 × PBS 浸洗 3 次，每次 3 min。 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min，1 × PBS 浸洗玻片 3次，每次 3 min。 0.5%Triton X-100(1× PBS 配制 )室温通透细胞 15 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）, 1 × PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min。 封闭 吸水纸吸干 1 ×PBS，在玻片上滴加 5% 的正常血清（与二抗种属来源一致或相似），室温封闭 1 h
实验流程：多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上，随后即可衔接下一轮单标染色，直至全部标记完成，即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合：1）新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2）梯度乙醇浸片，100% 5min；95% 5min；70% 2min。3）灭菌水洗片1min，重复3次。4）10%中性福尔马林浸片10min，灭菌水洗片1min，重复3次。2.微波修复：1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中，用抗原
于线粒体外膜表面，或者线粒体嵴上，或者仅需观察经处理后线粒体的形态及分布以选择不同的荧光蛋白/荧光有机小分子探针/纳米荧光探针等 （一般来说荧光蛋白比小分子荧光探针体积更大，在超微显像过程中较大小分子荧光探针等更有利于显微结构的染色）。2、减少背景噪声一张清晰的研究图片应当避免过多的干扰光点出现。在免疫荧光实验中，应尽量保证每次 PBS 清洗次数和时间，减少杂质。细胞免疫荧光相比较于组织免疫荧光略有区别，一抗应在孔板内完成孵育步骤，载玻片上孵一抗时免疫组化笔干燥结块脱落会引起再爬片杂光。此外尽量保证
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
