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- 2025年07月15日
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艾柏森（北京）生物科技有限公司
抗体基因库转化大肠杆菌：将以上扩增的抗体基因库连接至pComb3质粒，随后电转化大肠杆菌XL12 Blue；同时鉴定基因库库容（及抗体基因的插入率）；
噬菌体Fab抗体库的构建：将辅助噬菌体VCSM13加入到转入了抗体基因的，生长至对数生长期的大肠杆菌中进行噬菌粒拯救；培养过夜后，离心收集上清即获得噬菌体Fab抗体库；
抗体库的滴度测定：取少量上述获得的噬菌体Fab抗体库，梯度稀释后进行噬斑培养实验，观察噬斑生长情况以判断噬菌体Fab抗体库的滴度；
噬菌体抗体库的富集筛选：使用靶标抗原包被酶联板，加入噬菌体抗体进行孵育，随后进行洗板、洗脱；将洗脱下来的噬菌体抗体进行中和后，再次感染细菌，并进行第二轮的淘洗；共进行3轮淘洗，每一轮洗脱后都进行滴度测定；最后一轮筛选时，设BSA包被的对照组以确定是否富集了大量抗BSA的噬菌体抗体。
ScFv基因库转化大肠杆菌：将ScFv基因片段连接至pCANTAB5e载体，随后电转化大肠杆菌TG1；同时鉴定ScFv基因库库容（及基因的插入率）；
噬菌体ScFv抗体库的构建：将辅助噬菌体M13K07加入到转入了ScFv抗体基因的，生长至对数生长期的大肠杆菌中进行噬菌粒拯救；培养过夜后，离心收集上清即获得噬菌体ScFv抗体库；
抗体库的滴度测定：取少量上述获得的噬菌体ScFv抗体库，梯度稀释后进行噬斑培养实验，观察噬斑生长情况以判断噬菌体ScFv抗体库的滴度；
噬菌体抗体库的富集筛选：使用靶标抗原包被酶联板，加入噬菌体抗体进行孵育，随后进行洗板、洗脱；将洗脱下来的噬菌体抗体进行中和后，再次感染细菌，并进行第二轮的淘洗；共进行3轮淘洗，每一轮洗脱后都进行滴度测定；最后一轮筛选时，设BSA包被的对照组以确定是否富集了大量抗BSA的噬菌体抗体。
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文献和实验噬菌体展示技术是一种高效基因表达筛选技术，将外源蛋白或多肽与特定的噬菌体衣壳蛋白融合，展示在噬菌体表面并保持相对独立的空间构象和生物活性，有利于靶分子的特异性识别及结合，从而实现基因型和表达型的统一。 噬菌体展示技术因其独特的优势，现已广泛应用于抗原表位分析、单克隆抗体的制备、抗体人源化、药物筛选、疫苗研制以及免疫学疾病诊断、治疗等科学研究领域。 噬菌体技术为啥这么好用？为了一探究竟，我们先来弄清噬菌体是个啥？ 噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物病毒的总称，因部分能引起
噬菌体展示库(phage display library) 的基本原理是将外源基因同丝状噬菌体 fd 或 MB 的外壳蛋白 P8 基因或 P3 基因融合后导入噬菌体基因组，表达产生的外源肽与外壳蛋白 P8 或 P3 形成融合蛋白，展示在噬菌体的表面。导入了各种各样外源基因的一群噬菌体，就构成一个展示各种各样外源肽的噬菌体展示库。当用一个蛋白质去筛查一个噬菌体展示库时，就会选择性地同与其有相互作用的某个外源肽相结合，从而分离出展示库里的某个特定的噬菌体，研究该噬菌体所含外源基因的生物学功能
相关专题 蛋白表达技术全攻略 噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时,外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。到目前为止，人们已开发出了单链丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统等数种噬菌体展示系统。本文主要概述了噬菌体展示技术的基本原理、噬菌体展示系统研究以及技术特点等，并跟踪了目前该领域的最新研究进展和发展
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