北京现货动物组织细胞DNA提取试剂盒品牌

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名称：北京现货动物组织细胞DNA提取试剂盒品牌
品牌：百奥莱博
规格：50次|100次
产地：国产|进口
编号：RFT035
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，能提取多种细胞/组织中的基因组DNA。离心吸附柱可以高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

提取效率：
动物细胞培养液(样本量10^6～10^7)：5～30 μg
动物组织(样本量30mg)：10～30μg

试剂盒组分;

 

组份	50次	100次	贮存方式
缓冲液GA	15 ml	30 ml	室温
缓冲液GB	15 ml	30 ml	室温
去蛋白液GD(浓缩液)	18 ml	36 ml	室温
漂洗液PW(浓缩液)	25 ml	25ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	15 ml	室温
蛋白酶K(20 mg/ml)	1ml	2×1ml	-20℃
RNase A(10 mg/ml)	0.5 ml	1 ml	-20℃
吸附柱CG	50个	100个	室温
收集管(2 ml)	50个	100个	室温
说明书	1份	1份

准备工作：
1. 准备55℃和70℃水浴；无水乙醇；1.5ml灭菌离心管。
2. 按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液GA，缓冲液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、处理材料：
a. 培养细胞：贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液(如用PBS缓冲液或类似缓冲液)，10,000 g离心1分钟，倒尽上清，加入200μl缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
b. 组织：取约30mg动物组织(脾组织用量应少于10 mg)加入到事先盛有200μl 缓冲液GA的1.5ml离心管中，用研磨杵彻底将组织研碎。
2、加入20μl蛋白酶K (20 mg/ml)溶液。
a. 提取细胞基因组时，加入蛋白酶K混匀后，55℃放置5-10分钟。
b. 提取组织基因组时，加入蛋白酶K混匀后，在55℃放置，直至组织溶解。
注：不同组织裂解时间不同，通常需1-3小时即可完成(鼠尾需要消化过夜),期间间歇颠倒混匀样品。
3、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液，混匀后室温放置2分钟。
4、加入220μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置一段时间后会消失。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，会影响DNA的纯度和得率，而且可能导致步骤6中离心柱堵塞。
5、加入220μl 无水乙醇，颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入乙醇后会产生絮状沉淀，可用枪头反复抽打1-2次将沉淀弄碎后再上柱。如果絮状物未做处理，容易导致步骤6中离心柱的堵塞。
6、将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，11000g离心2分钟，倒掉废液，吸附柱CG放回收集管中。
注：如果出现吸附柱堵塞现象，可将离心时间延长到5分钟。
7、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
8、向吸附柱CG中加入700μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
9、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液。
10、将吸附柱CG放回废液收集管中，11000g离心2分钟。
注：此步骤非常重要，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11、将吸附柱CG转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，11000g离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于100μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
12、DNA产物-20℃保存。

储存条件：室温，有效期12个月。

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