北京现货T7体外转录试剂盒批发

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京现货T7体外转录试剂盒批发，产品信息：

类别：核酸扩增(PCR)

英文名：T7 in vitro Transcription Kit

产品名	产品编号	包装规格
T7体外转录试剂盒	BTN91106	50次

编号：BTN91106

品牌：百奥莱博

产地：国产|进口

规格：50次

本试剂盒是基于T7 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有T7启动子的模版DNA，以NTP为底物，从T7启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

 

产品特点：

1. 即开即用，用户只需提供含T7启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。

4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。

5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。

6. 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

 

试剂盒组成：

 

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 Kb片段)	20μL(10ng/μL)
T7 RNA聚合酶	50μL
RNase-free水	1mL
说明书	1份

 

储存条件：-20℃保存、有效期一年。

 

使用方法：

 

一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考)

 

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。

1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。

2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考)

 

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。

1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。

2)需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子下游。

3)需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(比如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。

4)必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此来判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

 

二、体外转录反应

1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

 

成分	加入量	备注
DNA模板		如果使用质粒DNA,必须反复酚-*仿抽提去除残留的RNase,然后再乙醇沉淀质粒DNA需室温时使用
PCR片段	50ng左右
质粒DNA	1μg左右
阳性对照	4μL
转录预配液，2×	10μL
T7 RNA聚合酶	1μL
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸。

2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。

3. 70℃加热10分钟灭活T7 RNA聚合酶。

4. 取1-3μl电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。

5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

 

三、去除DNA模板(所需试剂可从本公司另购)

1.在体外转录体系中加入1μL自备的RNase-free DNase(3-5U/μL)。

2. 37℃保温15-30分钟。

3. 补水到100μL。

4. 用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。

5. 加自备的200μL微量核酸沉淀剂(用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。

6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。

7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。

8. 晾干，所得沉淀即体外转录所得的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

 

疑难解答：

1、没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。

2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。

3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T7 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。

4、RNA长度比预计的长。T7 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。

5、5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则T7 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。

北京现货T7体外转录试剂盒批发专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：T7 in vitro Transcription Kit,BTN91106,T7体外转录试剂盒

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