北京现货平末端DNA加T试剂盒怎么卖

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北京现货平末端DNA加T试剂盒怎么卖由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多平末端DNA加T试剂盒等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京现货平末端DNA加T试剂盒怎么卖
规格：50次
产地：国产|进口
编号：BTN60106
品牌：百奥莱博
英文名：dT Tailing Kit
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dTTP存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dT尾巴，主要用于制备T载体。其流程图如下：


产品特点：
1. 简单，2X Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA成本polymerase等酶合成的DNA片段。
3. 加T后的载体可以作为T载体使用。

产品组成：

 

成分	规格
Taq DNA olymerase(5U/μL)	50μl
2×dT Tailing Buffer	1.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：反应前纯化处理：
平末端DNA片段或平末端质粒DNA可以采取胶回收和酚/*仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1μg/μL为宜。必须注意的是，用Vent，Deep Vent，Pfu，Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/*仿抽提或Proteinase K处理)，否则它们将在加T反应时，切除掉加上的T尾巴，干扰反应。
二：加T反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中，分别加入下列成分：

回收的DNA片段	0.2-2μg
2×dT Tailing Buffer	25μL
Taq DNA polymerase(5U/μL)	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时

三：反应后处理
加T反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/*仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/*仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于后续连接反应。

想要了解更多关于北京现货平末端DNA加T试剂盒怎么卖的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：

·琼脂糖
编号：BTN81105
英文名称：Agarose
规格：100g
琼脂糖电泳是核酸分析的最重要的方法之一，本产品可以满足大部分常规核酸电泳的要求，包括PCR电泳、质粒电泳、RNA电泳等等。产品透明度好，溶解快，胶液清澈透明；强度高，保证凝胶的强度与弹性，即使是低浓度的凝胶也不易发生破碎。低电内渗，减少对电泳质迁物迁移与分离的影响。极低的背景，没有其它荧光物质干扰，泳带与背景黑白分明，拍摄的图片效果好。没有核酸酶和蛋白酶污染。

储存条件：常温运输及保存。有效期两年。

·分枝杆菌RNA提取试剂盒
编号：BTN130843
英文名称：Mycobacterium RNA extraction kit
规格：50次
琼脂糖电泳是核酸分析的最重要的方法之一，本产品可以满足大部分常规核酸电泳的要求，包括PCR电泳、质粒电泳、RNA电泳等等。产品透明度好，溶解快，胶液清澈透明；强度高，保证凝胶的强度与弹性，即使是低浓度的凝胶也不易发生破碎。低电内渗，减少对电泳质迁物迁移与分离的影响。极低的背景，没有其它荧光物质干扰，泳带与背景黑白分明，拍摄的图片效果好。没有核酸酶和蛋白酶污染。

储存条件：常温运输及保存。有效期两年。

·NP40裂解液
编号：BTN131009
英文名称：NP40 Lysis Buffer
规格：250mL
NP-40裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。

产品特点：
1．本产品裂解能力强度温和，对膜蛋白的处理能力一般；对核蛋白的提取能力较好；对胞浆蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子处理效果很好。
2．本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。
3．本产品的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40以及sodiu*(代"m") pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodiu*(代"m") orthovanadate，sodiu*(代"m") fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。
4．用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA法蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

对于培养细胞样品：
1．融解NP-40 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2．对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150～250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-～250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3．充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

对于组织样品：
1．把组织剪切成细小的碎片。
2．融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3．按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4．用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5．充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6．如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

备注：
1．为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2．裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。


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Caspase 8 活性检测试剂盒(比色法)   50T|100T
*化溶菌酶 Tannase 9066-59-5
ARB10775 人抗乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)酶标法分析 Human anti-hepatitis b virus surface antibody,hbsab ELISA KIT
F030836 BIOTIN标记山羊抗猪IgG抗体 Polyclonal Goat Anti-Pig IgG*BIOTIN
ARB13219 小鼠黄体生成素释放激素(LHRH)酶联免疫定量检测 Mouse luteinizing hormone-releasing hormone,lhrh ELISA KIT
玫瑰红三羧酸铵 Indoxyl-Glucoside 569-58-4
BL0279 胰蛋白酶-EDTA含酚红
BTN100810 超快蛋白银染试剂盒 Rapid Silver Stain for Protein
ARB13396 羊弓形虫(Tox)酶联免疫定量检测 
75621-03-3 3-[3-(胆酰胺丙基)二甲*基]丙磺酸内盐 CHAPS
BL1047 LB肉汤
F050312 小鼠IgA抗体 Mouse IgA
BL0820 HRP标记兔抗山羊IgG抗体
内质网提取试剂盒   50T|100T
25322-68-3 PEG8000   聚乙二醇
ARB13379 牛副结核(Paratuberculosis)酶标法分析 
ARB13786 豚鼠白介素12(IL-12/P70)酶免分析 Guinea pig interleukin-12,IL-12/p70 ELISA KIT
PY02-293  MRS琼脂  250克  
H0401 小牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
ARB13681 兔血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)elisa检测说明书 Rabbit vascuolar cell adhesion molecule 1,vcam-1 ELISA KIT
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·酿酒酵母Y187感受态细胞
编号：BTN140389
英文名称：E.coli Y187 Rosetta Competent Cell
规格：10×100μL
 Y187菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母单杂，双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGold，AH109等)通过mating 操作进行筛库试验。Transformation marker 为: trp1，leu2，报告基因为：lacZ，MEL1。Y187-GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1～ 174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端768～881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4 系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N 端1～174 位*基酸区段的DNA 结合域(DNA-BD)和位于C端768～881 位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD 单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD 不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD 融合，形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果 bait和prey发生相互作用，就会促使 BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y187 有两个报告基因：lacZ，MEL1，分别由两种不同的启动子(G1，M1)启动，这两种启动子只有GAL4 识别的17bp 核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。

 Y187感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株，本产品经特殊工艺制作而成，经PGADT7质粒检测转化效率为104 cfu/μg DNA。

菌株基因型：MATα，ura3-52，his3-200，ade 2-101，trp 1-901，leu 2-3，112，gal4Δ，met–,gal80Δ，URA3: :GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ，MEL1

产品组成：

成分	规格
Y187感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7(control vector)，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/liAC、PGADT7质粒4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入预冷的目的质粒2-5μg，CarrierDNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)10μL，PEG/LiAc 500μL，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μL ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取 50μL ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

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