即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS) 克隆与表达

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百奥莱博专业生产供应即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS) 克隆与表达，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS) 克隆与表达
品牌：百奥莱博
编号：BTN60603
英文名：Instant Blue-White Vector T，Type A
本产品是用Xcm I酶切环状的可保种型蓝白T载体(BTN60803)去掉一段1.3Kb的插入片段后得到的线性DNA片段(载体部分)，其两个末端的5´都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过Xcm I酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4. 克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

 

成分	规格
即用型蓝白T载体(40ng/uL)	20μl
阳性对照(40ng/uL)	5μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用方法：

一. PCR产物的纯化和定量
1. 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分离。最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
2.在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免嘧啶二聚体的形成，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)。
3. 用百奥莱博的柱式DNArc(BTN60202)纯化回收PCR片段。溶解PCR片段的超纯水体积越小越便于后续操作。
4. 将回收的片段与浓度已知的DNA Marker在含EB(BTN3180)或绿如蓝染料(BTN70303)的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的荧光强度而估测PCR纯化产物的浓度。注意：一般不推荐使用测OD260的方法，因为回收的DNA很珍贵，该方法需要比较多的DNA。
5. 如果所得的DNA片段浓度较低，可以使用本公司核酸浓缩剂(BTN110801)将其浓缩到需要的浓度。
6. 如果PCR片段为平末端，则需要用加A试剂盒处理，否则不能用于与T载体的连接反应。

二. 连接反应
1. 短暂离心装有T载体的离心管。
2.在两个离心管中加入下列成分：

成分	样品管	负对照	正对照
自备T4 Ligase Buffer，10×	1μl	1μl	1μl
蓝白T载体(40 ng/uL)	1μl	1μl	1μl
自备PCR纯化产物	见下注	不加	不加
阳性对照(40ng/uL)	不加	不加	1μl
自备T4 Ligase(5-10U/μL)	1μl	1μl	1μl
补超纯水到	10μl	10μl	10μl

注：PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比最好为3-10，可以按下面的公式计算出连接反应中需要的PCR纯化产物的ng数:

假如插入片段和载体的连接比例设定为3，连接反应中加入蓝白T载体(长度为3Kb)的量为40ng，则需要长度为0.5Kb的PCR纯化产物的量是:

3. 用移液器吹打连接反应使之混匀后，16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的说明书进行连接)。

三. 细菌转化
1. 将100μL感受态细胞于冰上解冻。注意：最好使用转化效率在1×108cfu/μg DNA以上的感受态细胞进行转化，因为采用单碱基突出端进行连接不是很有效。
2. 取5μL连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
3. 将管放入预加温到42℃的水浴中，热休克90秒。快速将管转移到冰浴中。

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Quant One Step RT-PCR kit 
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ARB11302 人复合前列腺特异性抗原(CPSA)Elisa方法检测 Human complex edprostate specific antigen,cpsa ELISA KIT
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·红色DNA上样液(6×,非甘油)
编号：BTN130958A
英文名称：DNA Loading Buffer(Red)
规格：10mL

·溶菌酶溶液(10mg/mL)
编号：BTN100815
英文名称：Lysozyme Solution
规格：1.5mL
本产品是浓度分别为10mg/mL的蛋清型溶菌酶溶液，可以用于下列分子生物学实验。
➤ 核酸纯化；
➤ 包涵体蛋白纯化；
➤质粒DNA纯化；
➤ 几丁质的水解；
➤细胞壁的水解。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


·一管式双链cDNA合成试剂盒
编号：BTN130308
英文名称：One-Tube double-stranded cDNA Synthesis Kit
规格：10次
本产品是用于一管式双链cDNA合成的试剂盒。cDNA第一链合成的原理是以OligodT为通用引物的、MMLV催化的逆转录反应。其原理如下：


cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链，其原理图如下：


产品特点：
1. 即开即用，含有合成两条cDNA链的所有试剂。
2.适用于含poly rA的RNA，对不含poly rA的RNA(如细菌RNA)，不能使用本试剂盒制备ds cDNA。
3.一管式进行，第一链cDNA合成后不需要任何处理，直接进入第二链的合成。
4. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
5. 本试剂盒足够10次80μL体系的双链cDNA合成反应。
6. 如果需要合成全长cDNA，最好选用SMART全长cDNA双链合成试剂盒。

试剂盒组成：

成分	规格
Oligo dT引物	10μl
cDNA第一链合成缓冲液	40μl
MMLV 逆转录酶(200U/μL)	10μl
5×cDNA 第二链合成缓冲液	160μl
20×cDNA 第二链合成酶混合液	40μl
T4 DNA聚合酶	20μl
0.2 M EDTA溶液	40μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：mRNA的制备
本试剂盒不提供mRNA提取试剂，用户需自备相关试剂。

二：双链cDNA的合成
1.在一个干净的塑料离心管中，按下表设置cDNA合成反应：

成分	用量
自备mRNA样品	4μl(0.5-2μg)
Oligo dT引物	1μL
70℃ 2分钟后室温放置2分钟，短暂离心
cDNA 第一链合成缓冲液	4μL
MMLV 逆转录酶	1μL
轻柔吹打混匀后42℃保温90分钟合成第一链cDNA
超纯水	48μL
cDNA 第二链合成缓冲液	16μL
cDNA 第二链合成酶混合液	4μL
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时
自备的T4 DNA聚合酶	2μL
轻柔吹打混匀后，16℃继续保温30分钟
0.2M EDTA溶液	4μL

注：如果不需要将双链cDNA平末端化，则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。
2.电泳5μL检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片，则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常，需查找原因后再继续。
3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA 文库构建、抑制性差减杂交等实验。

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