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- 提供商:
上海代轩生物科技有限公司
- 服务名称:
免疫荧光
- 规格:
张/指标
一、免疫荧光
免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。该技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。
二、实验操作流程
1. 固定
2. 清除内源性过氧化物酶
3. PBS洗
4. 封闭
5. 孵育一抗
6. PBS洗
7. 孵育二抗
8. PBS洗
9. DAPI复染
10. 封片
11. 荧光显微镜观察
12.拍照,数据分析
三、服务说明
客户提供:细胞株或细胞爬片,组织或石蜡切片、冰冻切片,抗体(抗体本公司可代购)
结果提供:详细的实验报告、图片分析
外地客户可寄送,上海本地客户可上门收样。
荧光双标的抗体需特别注意,两种目的蛋白的抗体(一抗)种属来源不能相同
| 服务项目 | 收费标准 | 标本要求 | 备注 |
| 免疫荧光(IF)单标 | 55元/样本/指标 | 切片 | 客户提供一抗(本公司可代购) |
| 免疫荧光(IF)双标 异源 | 75元/样本/指标 | 切片 | 客户提供一抗(本公司可代购) |
| 免疫荧光(IF)单标 爬片 | 60元/样本/指标 | 切片 | 客户提供一抗(本公司可代购) |
| 免疫荧光(IF)双标 爬片 | 80元/样本/指标 | 切片 | 客户提供一抗(本公司可代购) |
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文献和实验固定和透化 在培养板中将已爬好细胞的盖玻片用 1 × PBS 浸洗 3 次,每次 3 min。 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min,1 × PBS 浸洗玻片 3次,每次 3 min。 0.5%Triton X-100(1× PBS 配制 )室温通透细胞 15 min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤), 1 × PBS 浸洗玻片 3 次,每次 3 min。 封闭 吸水纸吸干 1 ×PBS,在玻片上滴加 5% 的正常血清(与二抗种属来源一致或相似),室温封闭 1 h
实验流程:多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上,随后即可衔接下一轮单标染色,直至全部标记完成,即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合:1)新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2)梯度乙醇浸片,100% 5min;95% 5min;70% 2min。3)灭菌水洗片1min,重复3次。4)10%中性福尔马林浸片10min,灭菌水洗片1min,重复3次。2.微波修复:1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中,用抗原
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