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腺相关病毒包装
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腺相关病毒载体
腺相关病毒(AAV)是一种复制缺陷型细小病毒,其增殖复制需要腺病毒或疱疹病毒的辅助。由于其安全性好、宿主细胞范围广(分裂和非分裂细胞)、免疫源性低,在体内表达外源基因时间长等特点,这些特点使重组AAV成为用于基因转移和基因治疗的一个非常有吸引力的工具载体。

迄今为止,许多临床试验使用腺相关病毒载体进行基因治疗,包括CFTR,Hemophilia B, Arthritis 和 Parkinson's diseas,临床I期和II期试验都获得理想的结果。
AAV病毒具有明显的组织噬性,如:
AAV1载体:明显的骨骼肌嗜性(包括心肌),神经组织也可以感染;
AAV2载体:泛嗜性;最早应用的AAV载体。有效转导肌肉,肝脏,脑组织,对于视网膜的转导效率和表达水平良好
AAV5载体:视网膜、神经系统、关节滑膜嗜性、肺;
AAV8载体:明显肝嗜性,视网膜、神经组织也可以感染;
AAV9载体:心肌嗜性,可穿过血脑屏障;
AAV-DJ:广谱性侵染各种细胞,可做细胞实验
免疫反应:先存免疫(如AAV2)、反复给药引起针对AAV的免疫反应。
腺相关病毒用于基因传递和表达的优势
1) 宿主细胞范围广
腺相关病毒可以感染广泛的哺乳动物细胞并且以成功应用于人源和非人源蛋白的表达,宿主细胞活跃的分裂不是感染的必要条件,重组腺相关病毒能感染分裂期和非分裂期细胞。
2) 长期的基因表达能力
重组AAV能保存于人类宿主细胞中,保持长期的基因转录表达能力,对于终末分化的细胞这个优点特别明显。
3) 低免疫原性
与已获得临床应用的腺病毒载体相比,AAV在注射后引起的免疫反应是微弱并且短暂的。
4) 良好的扩散性能
AAV的病毒粒径只有腺病毒的1/5,慢病毒的1/4,体积上相差数十倍到100倍,所以AAV的扩散性远高于这两种病毒。
5) 较高的生物安全级别
AAV是天然缺陷型病毒(生产性感染依赖于几个额外的反式因子),并且目前还没有发现它和任何的人类疾病有关联。在AAV Helper-Free System中,AAV反向重复(ITR)序列和rep/cap基因分别位于缺少共同序列的单独的质粒上,以阻止生产出重组野生型病毒。这样特征赋予了作为病毒来源的基因传递和表达系统的AAV Helper-Free System一个较高的生物安全级别。
产品与服务优势:
高纯度重组AAV病毒,内毒素含量低,不容易引起非特异性的免疫反应,动物实验优选病毒载体;
重组AAV病毒形成附加体,游离于细胞基因组外;
重组AAV病毒90%的序列为外源基因,且不能编码蛋白质,没有自我复制和整合的能力,不具有制毒性;
重组AAV病毒滴度可达1E+13v.g/ml,有多种血清型可供选择,能够感染绝大部分的组织和细胞;
现货腺病毒:
仅需1个工作日;
超1000热门基因/基因过表达腺病毒;
超500热门基因RNAi靶点腺病毒;
自噬双荧光、荧光素酶、CRE、Ad5/f35嵌合体等;
定制腺病毒:
超100腺病毒载体,涵盖过表达、干扰、CRISPR/CAS9等调控方式
定制周期40个工作日起,滴度可达1E+12PFU/ml
【产品保存】
1)收到病毒后请置于-80°C 冰箱中长期保存,避免反复冻融,多次冻融会降低病毒的活性(滴度)。
2)使用前请将病毒从-80°C 冰箱中取出,进行冰浴融化。如需多次使用请分装,分装体积 3~5μL,分装请使用无菌的 PCR 小管,进口的低吸附塑料小管为佳。
3)在病毒使用过程中,应避免细菌等其他微生物污染,特别是细胞实验时,应保持其无菌,以免污染细胞。当同一种病毒既要用于动物实验,又要用于细胞实验时,建议将两种病毒分开放置,以免发生交叉感染。
4)当病毒在-80°C 条件下存放超过三年以上时,请安排重新检测滴度。
【注意事项】
1)实验操作需要在BSL-2实验室和ClassⅡ生物安全柜条件下进行,并穿戴好实验服、口罩和手套等个人防护用品;
2)如需要离心,应使用密封性好的离心管,如有必要请用封口膜封口后离心;
3)如果实验时本品不慎溅出,请立即使用84消毒液对其进行灭活处理,如果溅到眼睛、皮肤或其他身体部位请立即使用大 量清水冲洗;
4)使用本品所产生的实验废弃物需要通过高压灭菌处理后按照医疗废弃物处理要求进行处理;
5)实验结束后注意使用肥皂清洗双手。


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文献和实验腺相关病毒(AAV)作为一种安全、持久、高效、高特异性的基因操作工具,在生物学特别是神经生物学领域中被广泛使用。许多新手对于 AAV 的使用往往是知其然而不知其所以然。这篇短文将以图文结合的形式争取让大家在最短的时间内全面了解这种病毒工具。 什么是 AAV? 野生型 AAV 是一种复制缺陷型微小病毒,需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。而我们做实验用的是不需要辅助病毒的重组 AAV 病毒(rAAV)。将目的基因的 CDS 区序列或者 RNAi 干扰序列插入 rAAV 表达质粒中,包装
一、腺相关病毒简介腺相关病毒(Adreno-Associated Virus, AAV)是微小病毒科(Parvoviridae)家族的成员之一。这一家族成员是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。病毒颗粒的直径在20~26nm之间,含有大小在4.7~6kb之间的线状单链DNA基因组。它的复制和增殖依赖于辅助病毒的存在。作为一种基因导入系统,AAV病毒载体具有安全性好,免疫原性低,能感染分裂细胞和非分裂细胞,能介导基因的长期稳定表达等优点,因此在神经系统的体内和体外研究中,受到越来越多的关注
腺相关病毒(AAV)助力心脏研究与治疗










