首页 » 技术服务 » 分子生物 » 病毒转染系统 » 腺病毒包装/腺病毒载体

腺病毒包装/腺病毒载体

腺病毒包装/腺病毒载体
技术资料: 下载技术资料
 丁香通采购保障计划,让您的采购更放心。查看详情

供应商信息

和元生物技术(上海)股份有限公司
商家诚信度:
成立时间:2013
入驻丁香通年限:5年
商家等级:金牌客户
产品信息完整度:63%
联系人:毛女士 点击这里给我发消息

若您通过QQ未能联系到商家,您可以给商家发送站内信,与其取得联系。

扫一扫
微信联系商家

邮件: mlh@oobio.com.cn

手机:13501676670

电话:021-31601005

地址:上海市浦东新区国际医学园区紫萍路908弄19号楼

该商家已通过实名认证
 

产品详情

简介: 和元上海可以提供高滴度腺病毒,满足各种科研实验需求
提供商: 和元上海
服务名称: 腺病毒|腺病毒包装|腺病毒包装服务|腺病毒载体|Adenovirus|Adv
地区: 上海
规格: PFU/ml

腺病毒包装/腺病毒载体/Adenovirus

 

腺病毒介绍:

腺病毒(Adenovirus,ADV)是一种非整合型DNA病毒,直径在70~90nm,病毒颗粒有252个壳粒呈二十面体排列组成。

腺病毒(ADV)基因组是线状双链DNA,两端各有100bp的反向重复序列,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

根据DNA复制周期的不同,编码区分为早期基因区和晚期基因区:

前者又细分为E1~E4四个区,主要负责编码调节蛋白;而后者分为L1~L5五个区,负责编码结构蛋白。

腺病毒基因组中早期表达的调节蛋白可以调控晚期基因的表达,其中最先表达的是E1区基因,它所表达的蛋白(包括E2产物) 是腺病毒基因组复制、病毒包装和其他蛋白表达所必需的(图1)。

腺病毒感染过程剧烈,适于在短时间内进行基因高表达实验。

腺病毒作用机制

图1 腺病毒作用机制

现已知有51种人腺病毒,根据组织嗜性不同被分成ABCDEF六个不同亚群,其中C亚群的第2和第5血清型最常被用于构建腺病毒载体(表1)。

 

表1 人类腺病毒血清型分类

分组 血清型
A 12,18,31
B 3,7,11,14,16,21,34,35,50
C 1,2,5,6
D 8-10,13,15,17,19,20,22-30,32,33,36-39,42-49,51
E 4
F 40,41
 

腺病毒与慢病毒(LV)、腺相关病毒(AAV)、逆转录病毒(RV)载体相比,具有宿主范围广,免疫原性强,基因容量大,不与基因组整合,瞬间表达等特点,目前较为成熟的载体系统有非复制型(如AdMax)和复制型(又叫溶瘤腺病毒)两种。腺病毒适于在短时间内进行基因高表达的实验。

和元上海提供腺病毒包装服务,该服务的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程,采用二质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速梯度离心和过滤,并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。一般情况下腺病毒的滴度在10^10~10^11pfu/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。

病毒相关技术服务:

病毒包装服务     腺相关病毒包装     慢病毒包装    腺病毒包装     逆转录病毒包装

资料下载: 腺病毒.pdf 附件下载 (下载6 次)

相关产品

兔抗腺病毒Adenovirus Type 3多克隆抗体 丁香通标准抗体
品牌:LSBio  货号:LS-C83767  应用:免疫印迹  价格:$335.0 
腺病毒服务简介        腺病毒(adenovirus)是一种无包膜的线状双链DNA病毒。它的宿主范围很广,既可感染分裂细胞,又可感染非分裂细胞。逆转录病毒在感染宿主细胞时,病毒基因组及其携带的外源基因独立于宿主基因组外游离表达,因此无插入突变性,安全性更高。腺病毒载体的外源基因装载量较大、表达速度快,产生的病毒滴度高,因此已经被广泛应用于基础研究和基因治疗中。        辉骏生物使用的腺病毒包装系统包括一个穿梭质粒和一个辅助质粒,携带外源基因的穿梭质粒与含有腺病毒基因组(E1/E3缺失)的辅助质粒共转染包装细胞后,利用Cre-loxP重组酶切割系统,即可产生携带外源基因的非复制型重组腺病毒,重组效率大大提高。包装出的腺病毒液可直接感染宿主细胞,介导外源基因的瞬时、高效表达。       辉骏生物的腺病毒载体包含多种荧光标签(如GFP或RFP等)、多种抗性筛选标签和多种启动子,可充分满足客户不同实验设计的要求。腺病毒技术服务项目                                                                       表1 腺病毒服务项目及内容 分类 服务编号 项目名称 客户提供 服务描述 基因过表达腺病毒服务 FG201 基因过表达腺病毒载体构建 目标基因的模板 构建载体 FG202 基因过表达腺病毒包装套餐 目标基因的模板 (1)构建载体 (2)腺病毒包装 microRNA腺病毒服务 FG211 microRNA过表达载体构建 microRNA前体或初始产物模板 构建载体 FG212 microRNA过表达腺病毒包装套餐 microRNA前体或初始产物模板 (1)构建载体 (2)腺病毒包装 RNAi腺病毒服务 FG221 RNAi腺病毒载体构建 目标基因登录号或序列 (1)设计并合成1条干扰序列 (2)构建载体 FG222 RNAi腺病毒包装套餐A 目标基因登录号或序列 (1)设计并合成3条干扰序列(保
腺病毒包装腺病毒是一种线性双链DNA病毒,由于其具有宿主范围广、可感染分裂和非分裂细胞、高滴度制备、外源基因装载容量大等优点,重组腺病毒已越来越广泛地被应用于基础研究和临床试验中,并成为世界上最常用的基因治疗载体之一。宿主范围广,腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞,除可感染几乎所有人的细胞类型外,还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。因腺病毒的感染不依赖细胞周期,故其既可以感染增殖细胞也可以感染非增殖细胞。腺病毒具有嗜上皮细胞特性,因目前大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞,这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。病毒滴度高,可用于动物水平的实验。有较好的生物安全性。腺病毒携带的基因不会整合到宿主细胞基因组中;实验中虽然会有一定机率出现RCA(即复制型腺病毒),但由于大多数成人体内都有针对腺病毒的抗体,所以本系统的安全性相对较高。 ◇服务内容:1)腺病毒穿梭载体的构建:根据不同的研究需求构建腺病毒穿梭载体,如用于RNAi的腺病毒载体、用于基因过表达的腺病毒载体、用于启动子活性研究的腺病毒载体等;2)腺病毒包装过程:将腺病毒穿梭质粒及其辅助包装质粒共转染至包装细胞中,通过Cre/loxP系统的作用实现重组,产生重组腺病毒颗粒。◇服务流程:1)将外源基因构建至穿梭载体上;2)将穿梭载体与腺病毒骨架载体进行LR体外重组;3)将重组成功的腺病毒载体线性化,转染至HEK 293细胞中,包装腺病毒;3)将获得的腺病毒感染HEK 293细胞,继续扩增,以获得更多的腺病毒;5)收获腺病毒,提取其基因组DNA,进行PCR鉴定,以确定所得腺病毒的正确性。◇您只需提供:靶基因信息。◇我们提供:提供重组后的腺病毒载体质粒,以及试验结果报告单。◇实验周期:6-7周。 
蛋白质组学技术服务优惠大酬宾活动,只要你来,我们就送.一、腺病毒服务简介腺病毒(adenovirus)是一种无包膜的线状双链DNA病毒。它的宿主范围很广,既可感染分裂细胞,又可感染非分裂细胞。逆转录病毒在感染宿主细胞时,病毒基因组及其携带的外源基因独立于宿主基因组外游离表达,因此无插入突变性,安全性更高。腺病毒载体的外源基因装载量较大、表达速度快,产生的病毒滴度高,因此已经被广泛应用于基础研究和基因治疗中。辉骏生物使用的腺病毒包装系统包括一个穿梭质粒和一个辅助质粒,携带外源基因的穿梭质粒与含有腺病毒基因组(E1/E3缺失)的辅助质粒共转染包装细胞后,利用Cre-loxP重组酶切割系统,即可产生携带外源基因的非复制型重组腺病毒,重组效率大大提高。包装出的腺病毒液可直接感染宿主细胞,介导外源基因的瞬时、高效表达。辉骏生物的腺病毒载体包含多种荧光标签(如GFP或RFP等)、多种抗性筛选标签和多种启动子,可充分满足客户不同实验设计的要求。 二、腺病毒表达系统的特点1> 病毒基因不整合到染色体中,而是游离于宿主细胞染色体外瞬时表达,无插入致突变性;2> 有广泛的宿主范围,对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用;3> 不需要转染试剂,操作简便,转染效率极高;4> 外源基因装载容量大,可插入高达8kb的外源基因片段;5> 能同时表达多个基因,可以将含有两个基因的双表达盒插入腺病毒转移载体中,或者用不同的重组病毒共转染目的细胞株来分别表达一个蛋白;6> 病毒感染后,外源蛋白表达快,实验周期短。 三、腺病毒技术整体流程A. 腺病毒载体的构建:根据客户的不同需要,将目的基因片段连接至腺病毒穿梭载体;B. 腺病毒包装:腺病毒穿梭质粒与辅助质粒一起转染293细胞进行包装;收集富含腺病毒颗粒的细胞上清液,浓缩后进行滴度测试,得到滴度≥1×108 TU/mL的腺病毒液;                                                                 图1 腺病毒技术服务整体流程四、腺病毒穿梭载体元件       在腺病毒的包装系统中,腺病毒基因组质粒负责携带腺病毒的大部分骨架元件,穿梭质粒负责携带外源基因表达盒。两者共转染包装细胞后发生同源重组,携带外源基因的病毒基因
赛业生物采用第1代重组腺病毒包装系统制备腺病毒颗粒。该包装系统包含一个腺病毒载体和一株包装细胞株。1、一个腺病毒载体:缺失了E1和E3区域的腺病毒基因组序列被克隆到质粒上。2、一株包装细胞株:E1基因片段被整合到293细胞。 野生型腺病毒基因组是一条约36kb的线性双链DNA(dsDNA)分子。基因组的两个末端被称为Inverted Terminal Repeat(ITR),末端之间含有腺病毒DNA复制所需基因。在病毒DNA复制周期早期表达的基因,称为早期基因,主要有4个,按表达先后顺序依次是E1、E2、E3、E4。在病毒DNA复制周期晚期表达的基因,称为晚期基因,主要有5个,按表达先后顺序依次为L1、L2、L3、L4、L5。为了制备出自我失活的重组腺病毒,E1基因会被删除,使重组腺病毒成为一种安全的基因运输工具。为了增加包装能力,E3基因也同时被删除,因为E3基因产物会提高宿主的免疫反应,而且对病毒生产不重要。缺失了E1和E3基因的腺病毒基因组序列被克隆到质粒上构建成腺病毒载体。E1基因片段被整合到293细胞基因组中,包装病毒颗粒时,Pacl消化的腺病毒载体转染到表达E1基因的293细胞。E1基因激活了其他早期基因和晚期基因的表达,这些基因表达产物和Pacl消化的质粒DNA组装成病毒颗粒。  腺病毒生产生产携带目的基因的重组腺病毒颗粒的过程如下示意图: 将环形腺病毒载体通过PacI位点酶切后获得两末端是ITR序列的线性双链DNA,再转染线性化DNA到包装细胞。线性化双链DNA分饰两个角色,既是病毒基因组,又是病毒蛋白表达所参照的基因模板序列。病毒蛋白与基因组组装成病毒颗粒,病毒颗粒在细胞内成熟后,会使得细胞破裂,从而使病毒颗粒释放到培养液中。收集细胞和培养液,然后反复冻融细胞和培养液的混合物。离心收集上清,获得粗病毒。此时的粗病毒量通常不会很高。一般会将粗病毒感染更多的包装细胞,以扩增病毒量。病毒扩增后,只收集细胞。再反复冻融细胞,离心收集上清,即可获得转导细胞级别的病毒颗粒。如果您想获得注射动物级别的病毒颗粒,可以利用CsCl2超速离心进一步去除杂质,从而获得纯度更高的病毒颗粒。 质量控制我们对每一批病毒都进行滴度检测,严格控制质量,让您百分百放心。针对转导细胞级别的病毒颗粒,我们会采用TCID50滴度检测

数据正在加载,请稍候...

电话: 021-31601005 联系人: 毛女士 (联系我时请说在丁香通看到的)

30秒填写信息,方便商家与您及时沟通

您未登录,马上登录 注册,即可保存询价历史
换一个



询价发送成功

和元生物技术(上海)股份有限公司 会在1个工作日内联系您!

马上登录注册,即可保存询价历史

你可能感兴趣的产品

生物学霸
帮助你升级成为学霸。
查看