2×BaldStar Taq MasterMix(含染料)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括2×BaldStar Taq MasterMix(含染料) 核酸扩增(PCR)在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：2×BaldStar Taq MasterMix(含染料) 核酸扩增(PCR)
编号：WE0112
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：5ml
  本品是由BaldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，预混好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。该产品所含有的BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效Taq DNA Polymerase，在常温下酶的活性被完全封闭，使得该酶在低温或常温下没有活性，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的缓冲体系使酶的应用更为广泛，使GC含量高、二级结构复杂以及低拷贝的模板，均能高效扩增，特有的MasterMix配方使整个反应体系稳定性更强。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。用本品进行PCR扩增，PCR产物3"末端含有A，可直接用于T/A克隆。本产品特异性强，PCR扩增后无需胶回收去除杂带，可直接用于下游克隆或芯片杂交等实验。主要应用于常规的PCR、RT-PCR和多重PCR，特别适用于对特异性要求较高的PCR反应。

产品组成：

 

组份	5ml
2×BaldStar MasterMix(With Dye)	5×1ml
ddH2O	5×1ml

注意：2×BaldStar MasterMix含有BaldStar DNA Polymerase,3.4 mM MgCl2和 400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检测无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残留DNA；
3、能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；
4、2～8℃存放三个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	30 s	30-40 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30-60 s，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的BaldStar Taq DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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·cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)
编号：WE0133
英文名称：BalbScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit
规格：100次
  本试剂盒是用于去除基因组DNA进行反转录的试剂盒。该试剂盒在42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制gDNA Eraser的组分，经过 gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行逆转录反应合成cDNA。本试剂盒配有新型高效反转录酶BalbScript，新颖突变位点大幅提升酶的转录活性，cDNA第一链合成的效率和产量更高，可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA第一链。如逆转录产物cDNA用于下游荧光定量检测，可在42℃，15min完成逆转录反应。本试剂盒适用于第一链cDNA的合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR、以及全长cDNA文库的构建等。

试剂盒组成：

组份	25次	100次
gDNA Eraser	12.5μl	50μl
10×gDNA Eraser Buffer	30μl	120μl
BalbScript，200 U/μl	25μl	100μl
5×ScriptRT Buffer	120μl	500μl
Primer Mix	30μl	120μl
RNase-Free Water	1ml	2×1ml

产品特点
1、快速去除基因组：含有去除基因组DNA 的gDNA Eraser，只需2min即可除去基因组DNA。
2、快速逆转录：15分钟即可获得荧光定量PCR模板cDNA第一链合成。
3、灵敏度高：可利用pg级总RNA或mRNA模板合成cDNA第一链。
4、高效的逆转录效率：新颖突变位点大幅提升酶活性能，获得更高产量的cDNA。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。
2、逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于-20 ºC保存，并尽量避免反复冻融。
3、反应体系可倍比放大，10μl反应体系可最大使用1μg总RNA。
4、Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成， 也可根据实验需要选用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。
5、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号为WE0223。
6、对于二级结构复杂的RNA模板，建议在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分钟立刻置于冰上，短暂离心后进行下一步操作。

操作步骤：
将模板RNA在冰上解冻；试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。

一、去除基因组DNA反应
1、根据以下表格在冰上配制反应体系，总体积为10μl。为了保证反应液配制的准确性，先按反应数+2的量配制预混体系，然后再分装到每个反应管中，最后加入RNA样品。

试剂	10μl反应体系
10×gDNA Eraser Buffer	1μl
gDNA Eraser	0.5μl
RNA Template	10 pg-1μg
RNase-Free Water	up to 10μl

注意：如果总RNA量大于1μg，请按比例扩大反应体系。若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)，该产品货号为WE0223。

2、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3、42℃孵育2分钟(室温反应时，可以延长到30分钟)。
4、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。

二、逆转录反应

1、根据以下表格在冰上配制反应体系，反应液配制请在冰上进行。为了保证反应液配置的准确性，先按数+2的量配制成预混溶液，然后再分装 10μl到每个反应管中，取配制的预混液10μl加入至已完成去基因组的步骤1反应管中。
 

试剂	20μl反应体系
步骤1反应液	10μl
BalbScript，200 U/μl	1μl
Primer Mix	1μl
5×ScriptRT Buffer	4μl
RNase-Free Water	4μl

注意：可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建议20μl 反应体系Oligo-dT Primer 50pmol，或Gene Specific Primer 2 pmol。

2、混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3、cDNA合成反应条件：
1)若下游进行荧光定量PCR检测，42℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测，42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。
4、反应结束后，短暂离心后置于冰上，再进行后续PCR或荧光定量PCR，如果需要长时间保存，请置于-20℃。
注意：进行Real-time PCR反应时，逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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·FITC标记山羊抗兔IgG(H+L)
编号：WE0384
英文名称：Goat Anti-Rabbit IgG, FITC Conjugated
规格：100μl
本产品为FITC标记的经亲和纯化的山羊抗体，特异识别兔IgG，检测灵敏度高，本底低，对其他种属IgG无明显交叉反应，常用于免疫荧光和流式细胞等标记检测。

免疫原：兔IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：Immunofluorescence(1：25-100)

·Protein A琼脂糖凝胶
编号：WE0271
英文名称：Protein A-Agarose
规格：5ml
  本产品可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体 Fc片段的基因工程重组蛋白。具有高IgG结合特异性，高流速，低Protein A-Agarose脱落等特点。

注意事项：
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml，抗体浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性，以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右)，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸*缓冲液(pH3.0)做再生处理，长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。

使用方法：

I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液：纯化不同动物和不同亚型抗体时所用平衡缓冲液是不同的，部分参照如下。

抗体	平衡缓冲液成分
人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b	20 mM PBS，300 mM NaCl，pH7.4-8.5
人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3	50 mM Tris-Cl，3 M NaCl，pH7.8-8.5

2、洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸*缓冲液，pH4.0。
3、再生缓冲液：1 M NaCl。
4、中和缓冲液：1 M Tris-Cl，pH9.0。
注意：
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。

II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰，去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意：样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。

III 操作步骤
1、将Protein A-Agarose填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净，用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱，上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积，直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。
注意：收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中，最后根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积，再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积，再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。

储存条件：2～8℃，避免冷冻

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