北京DH5α感受态细胞品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京DH5α感受态细胞品牌在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京DH5α感受态细胞品牌
编号：WE0252
品牌：百奥莱博
规格：100μl×10支
英文名：DH5α Competent Cell
产地：国产|进口
  本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶*基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

产品组成：

 

组份	0.1ml×10支
DH5α Competent Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，
倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。

北京DH5α感受态细胞品牌极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·鼠尾基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0186
英文名称：Mouse&Rat Tail Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的小鼠或大鼠鼠尾中提取高纯度的总DNA。该试剂盒提供的方法简单易行，纯化过程无需*酚或*仿抽提，可获得最大为50 kb的DNA片段，同时对100 bp的片段也能有效回收。本试剂盒采用独特的裂解液，有效裂解鼠尾样本，优化的缓冲体系使裂解鼠尾后产生的DNA高效结合到硅基质吸附柱上，而其他污染物可流过膜；PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度的DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTT	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DM及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇

产品特点
1、专用于从大鼠或小鼠的鼠尾中分离纯化高纯度总DNA。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀，彻底去除污染物及下游反应抑制物，快速提取高品质DNA。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。

操作步骤：
1、取一段大鼠或两段小鼠长度为0.4-0.6 cm的尾巴，在液氮中研磨成细粉或剪碎放入离心管(自备)中。加入180μl Buffer GTT，振荡混匀。
注意：确保组织的起始量不要超出推荐范围。
2、加入20μl 蛋白酶K ，涡旋振荡，彻底混匀。
3、置于56℃水浴，直至组织溶液完全清澈，一般情况下需要消化6-8小时，孵育过程中涡旋震荡，使样品均匀分散。
注意：1)如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，必要时过夜消化或再加入20μl 蛋白酶K 消化，不会影响后续操作。
2)如需去除RNA，在上述步骤完成后加入4μl 100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
4、12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，以除掉未消化的类似于鼠毛等组织。将上清转移到一个新的离心管(自备)中。
5、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡，充分混匀。加入200μl无水乙醇，涡旋震荡，充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2)如果多个样品一起操作，Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。
3)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
6、将步骤5中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μlBuffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


北京DH5α感受态细胞品牌关键词：DH5α Competent Cell,DH5α感受态细胞,WE0252


·病毒RNA提取试剂盒
编号：WE0194
英文名称：RNAtiqu Virus RNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒采用可以特异性结合病毒RNA的吸附柱和独特的缓冲液系统，适用于从血清、血浆、尿液、脑脊液等无细胞体液及细胞培养上清液中分离病毒RNA。病毒RNA特异性地结合到硅基质膜上，而污染物则流过该膜。通过两次高效洗涤完全去除蛋白质等杂质，然后用无RNase的水或试剂盒提供的RNase-Free Water洗脱高纯度的病毒RNA。由本试剂盒提取的病毒RNA可直接用于RT-PCR、Real-time RT-PCR和印迹分析等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GL	15ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
蛋白酶K	12.5 mg
蛋白酶K 储存液	1.2 5ml
RNase-Free Water	10ml
吸附柱RS及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

自备试剂：无水乙醇，0.9% NaCl。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
3、血清或血浆避免反复冻融导致蛋白变性或产生沉淀，减少病毒滴度进而影响提取病毒核酸的产量。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、Buffer GL如果产生沉淀，可在56℃加热使其溶解后室温放置。
6、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、室温下取200μl血清或血浆加到1.5ml离心管(自备)中。
注意：不足200μl可以加入0.9 % NaCl(客户自备)补足。
2、向上步溶液中加入20μl 蛋白酶K ，混匀。
3、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡15秒。
注意：不要直接把蛋白酶K 加到Buffer GL中。
4、56℃ 孵育15分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
5、加入250μl无水乙醇，涡旋震荡15秒，室温孵育5分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
6、将步骤5得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入，12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl无水乙醇，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、12000rpm 离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：
1)这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
2)推荐步骤：将吸附柱放入一个新的1.5ml离心管(自备)中，打开管盖，56℃烘箱孵育3分钟，使吸附柱的膜彻底干燥。
11、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-50μl RNase-Free Water，室温放置5分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于20μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用20-50μl新的RNase-Free Water重复步骤11。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤11。

储存条件：室温(15～30℃)。


北京DH5α感受态细胞品牌关键词：DH5α Competent Cell,DH5α感受态细胞,WE0252


·FITC标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
编号：WE0392
英文名称：Goat Anti-Mouse IgG, FITC Conjugated
规格：100μl
产品为FITC(硫*酸荧光素)标记的经亲和纯化的山羊抗体，特异识别小鼠IgG重链和轻链。本产品检测灵敏度高，本底低，对其他种属IgG无明显交叉反应。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学、细胞化学、流式细胞分析等研究，在临床检验上也用于细菌、病毒和寄生虫的检验及自身免疫病的诊断等。本

免疫原：小鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：Immunofluorescence(1：25-100)

·TBS(pH8.0,10×)
编号：WE0313
英文名称：Goat Anti-Mouse IgG, FITC Conjugated
规格：500ml
产品为FITC(硫*酸荧光素)标记的经亲和纯化的山羊抗体，特异识别小鼠IgG重链和轻链。本产品检测灵敏度高，本底低，对其他种属IgG无明显交叉反应。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学、细胞化学、流式细胞分析等研究，在临床检验上也用于细菌、病毒和寄生虫的检验及自身免疫病的诊断等。本

免疫原：小鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：Immunofluorescence(1：25-100)

·多彩预染蛋白Marker
编号：WE0282
英文名称：Multicolor Protein Marker
规格：20次(100μl)|100次(5×100μl)
  本品由10.5-175 kD范围的11条蛋白组成(10.5 kD、14 kD、22 kD、29 kD、42 kD、51 kD、62 kD、70 kD、95 kD、130 kD、175 kD)。由低到高的分子量范围可监测电泳过程中的蛋白分离情况、判断目标蛋白的分子量，并且可以监测Western Blot实验中的转膜效率。10.5 kD、42 kD、95 kD的三条带结合有蓝色染料更便于实时观察电泳进程、判断蛋白分子量。本产品推荐上样量为5μl。

注意事项：
1、本品已包含上样缓冲液，直接使用，不可在100℃加热或煮沸。
2、为避免反复冻融及污染，可将本产品分装后，-20℃保存。

操作步骤：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、根据加样孔的大小，每泳道加5μl进行聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳。

实验图例

15%的聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳后结果

储存条件：-20℃保存，避免反复冻融。

北京百莱博科技有限公司是克隆与表达产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购北京DH5α感受态细胞品牌。