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- 文献和实验
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283
- 英文名:
E.coli SURE Chemical Competent Cell
- 保质期:
半年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-80℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌SURE化学感受态细胞品牌,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:大肠杆菌SURE化学感受态细胞品牌
编号:BTN90208
规格:0.1mL*10
英文名:E.coli SURE Chemical Competent Cell
品牌:百奥莱博
产地:北京
本产品是采用大肠杆菌SURE菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。该菌株主要是用来克隆不稳定DNA结构如重复序列、二级结构(如Z-DNA)等。
菌株基因型:
| 基因型 | 表现型 |
| endA1 | 核酸内切酶I缺失 |
| gyr A96 | 具有*啶酮酸抗性 |
| lac | 不能利用乳糖 |
| rec B & rec J | DNA重组修复功能缺失 |
| relA1 | 允许在无蛋白质合成时有RNA合成 |
| sbcC | 允许基本重组 |
| supE44 | 抑制琥珀突变,为某些噬菌体必需 |
| thi-1 | 需要硫*才能生长 |
| umuC::Tn5 | 卡那霉素抗性 |
| uvr C | 不能切除变异碱基 |
| mcrA△(mcr CB-hsdSMR-mrr)171 | DNA甲基化系统缺失 |
| F’[ lacIlac Z△M15 Tn10 proAB+] | 提供α-互补所需的ω片断,具有四环素抗性 |
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
除大肠杆菌SURE化学感受态细胞品牌外,我公司正在打折促销以下产品:
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大肠杆菌SURE化学感受态细胞品牌关键词:BTN90208,E.coli SURE Chemical Competent Cell,大肠杆菌SURE化学感受态细胞
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大肠杆菌SURE化学感受态细胞品牌关键词:BTN90208,E.coli SURE Chemical Competent Cell,大肠杆菌SURE化学感受态细胞
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北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购大肠杆菌SURE化学感受态细胞品牌。
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文献和实验实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系,使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞: 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株,常用 RM 符号表示。转化方法:电击
修饰。SURE感受态细胞针对uvrC,umuC,SbcC和RecJ等参与修饰的大肠杆菌基因或蛋白进行突变,提高了真核来源、不规则DNA的稳定性达20倍以上,并且适合克隆甲基化DNA。提供化学和电转化感受态细胞,效率分别达1x1010 和1x109 。ABLE® -克隆毒性 DNA 目的DNA的蛋白产物常常对细胞产生毒性,通常的解决办法是采用低拷贝质粒,或者采用极为严紧的表达调控。为了获得稳定的克隆,ABLE细胞减少ColE来源质粒的拷贝数(如pUC、pBluescript系列载体),以达到
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