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- 详细信息
- 技术资料
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597
- 英文名:
E.coli BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL Chemical Competent Cell
- 保质期:
半年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-80℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞品牌,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞品牌
编号:BTN140378
规格:10*100μl
英文名:E.coli BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL Chemical Competent Cell
产地:国产|进口
本产品来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株,缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶,从而减少对重组蛋白的降解,补充大肠杆菌缺乏的4 种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA)对应的tRNA(argU、ileY、proL、leuW),提高外源基因,尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3 区(DE3 区含有T7 噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达,同时具有四环素,*霉素,链霉素,壮观霉素抗性。本产品由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型为:F- ompT hsdS(rB-mB-)dcm+ Tetr galλ(DE3)endA Hte [argU proLCamr] [argU ileY leuW Strep/Specr]。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm ,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
5. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
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·增强型DAB显色试剂盒
编号:BTN81223
英文名称:Enhanced DAB Chromogenic Kit
规格:100mL
增强型DAB显色试剂盒中含有检测辣根过氧化物酶(HRP)的所有试剂,适合于检测各种印迹膜上标记的HRP。其反应原理是HRP可以催化底物DAB在目的蛋白所在的位置转变为深褐色的化合物,可根据颜色的有无和深浅来检测HRP的存在与否或存在量,进而推测HPR标记物识别的靶分子的位置及含量。该反应的示意图如下:

产品特点:
1.即开即用,不需要用户准备任何材料。
2.DAB以干粉提供,方便运输。
3.可用于各种印迹膜(包括Southern、Northern、Western印迹膜)和免疫组化中的组织切片。免疫组织显色后还可用Nuclear fast red复染。
4.跟PVDF膜、尼龙膜兼容。
5.显色过程中需要避光,在显色后可拍照或扫描。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| DAB干粉 | 100mg |
| 10mL棕色塑料瓶 | 1个 |
| DAB溶解液 | 100ml |
| 增强剂 | 1ml |
| H2O2 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
注意:本产品可以配制100mL增强型DAB显色液,但其具体使用次数根据跟印迹膜的大小密切相关。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期1年
自备试剂:超纯水、HRP标记物(抗体或探针)处理过的印迹膜。
使用方法:
1.从DAB溶解液中取5mL到一个10mL的棕色塑料瓶中(本试剂盒提供),将100mg DAB干粉全部加入,充分振荡混匀,所得溶液即是20×DAB浓缩液。此溶液如果一次不能用完,可以分装成小管在-20℃避光放置6个月。
2.按每cm2印迹膜需要0.1mL DAB显色液的比例计算所需显色液的量,并按下表配制DAB显色液(此处以配制10mL为例,用户如需要配制其他体积,可按比例增减各成分用量):
| 成分 | 用量 |
| DAB溶解液 | 9.4ml |
| 20×DAB浓缩液 | 0.5ml |
| 增强剂 | 0.1ml |
| H2O2 | 10μl |
注意:此溶液必须立即使用。
3.如果是印迹膜,则迅速将印迹膜转移到上步得到的DAB显色液中,室温避光静置。待印迹膜上出现满意的条带时(一般需要2-3分钟,最长不超过10分钟,具体跟靶分子浓度密切相关),迅速将印迹膜转移到盛有超纯水的托盘中摇晃,终止显色反应。数分钟后需要换水,共三次。用吸水纸吸干印迹膜上的水分,照相处理后避光干燥保存印迹膜。
4.如果是组织切片,则直接将DAB染色液滴加在切片上,室温避光放置10分钟,然后浸在超纯水中数次,空气中干燥后显微镜下检测或照相。
大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞品牌关键词:E.coli BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL Chemical Competen,大肠杆菌BL21-CondonPlus,BTN140378,大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞
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