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- 百奥莱博
- 北京
- BTN120402-XIF
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃运输及保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
LIC Cloning Kit for PCR
- 库存：
574
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")PCR专用LIC克隆套装品牌，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：PCR专用LIC克隆套装品牌
产地：国产|进口
编号：BTN120402
品牌：百奥莱博
规格：1μg
本产品就是基于LIC原理开发的即用型载体。LIC就是不依赖于连接的克隆技术(Ligation-Independent Cloning),它是继限制性内切酶切/连接酶克隆方法后出现的第二代DNA克隆技术，它效率高,尤其适用于大规模分子克隆，其原理如下：
产品特点：
1. 操作简单,一管式一步反应,只需加入插入片段即可,客户不需要购买任何额外的酶。
2.时间短,整个过程只要15分钟。
3.高效,比常用的AT克隆效率更高,阳性率接近于100%。
4. 克隆方向和位置精准和可控,适合表达型克隆工作。
5. 便于自动化,适合高通量克隆。
6.适用于长片段克隆。
产品组成：
| 成分 | 规格 |
| LIC载体(50μg/μL) | 1μg |
| 溶液A | 10μl |
| 溶液B | 150μl |
| 阳性对照插入片段 | 8μl |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：-20℃运输及保存，有效期一年。
一. PCR引物设计,合成和PCR反应
1. 按常规方法设计PCR引物,只是必须在一条引物5´端再加上GGCGGCCGCGGTAC序列,在另一条引物5´端加上GGCGCCGGCGGTAC序列。此序列决定克隆的方向,如果不在乎方向,可以随机组合。
2. 所用引物最好为HPLC纯化获得。注意：如果购买本公司产品,免费合成LIC引物一对。
3. 按常规的方法进行PCR,最好使用高保真DNA聚合酶。
4. 按常规的胶回收的方法回收PCR片段。注意：必须去除残余的dNTP和PCR引物,否则会极大降低LIC效率。
5. 对PCR片段电泳定量,即电泳后通过肉眼比较PCR片段和DNA Marker的相对强度,通过DNA Marker条带的浓度(一般商品化的DNA Marker每条带的浓度都是已知的)推测出PCR片段的浓度。
二. PCR片段与载体退火
1.在纯化的2μL PCR产物中加入0.4μL溶液A、2μL载体(100ng)以及5μL溶液B,混合。
注意：PCR产物跟载体的摩尔数比例最好是1：1。
2.室温放置5分钟。注意：保温时间长短很关键,不要轻易延长或缩短。
3.在PCR仪器上按75℃ 10分钟,然后放冰上或-20℃待用。
三.转化
1. 按常规方法进行转化。
2. 按菌落PCR方法筛选,可选用我公司的菌落PCR试剂盒(BTN50901)。进行快速筛选,需要T7和SP6 RNA聚合酶启动子引物。
欲了解更多PCR专用LIC克隆套装品牌的品牌、产地、价格及说明书等产品信息，请致电北京百奥莱博科技有限公司，我们将竭诚为您服务，另外，以下产品正在火爆促销:
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文献和实验) 克隆困难怎么办？ 对于大片段载体构建实验而言，难点在于片段扩增效率低、重组 / 连接困难、质粒稳定性差、容易发生断裂等。需针对这些痛点，从技术路线选择、实验细节优化两方面制定策略，具体方案如下： ①建议首先选择「分段克隆 + 拼接」 策略，降低连接难度； ②大片段克隆的关键在于长片段的扩增，所以需要从源头保证实验成功率，即保证模板完整度，在扩增前确保模板未发生降解；其次优化 PCR 体系，比如选择长片段专用 PCR 酶，通过梯度测试选择最佳模板上样量及退火温度等； ③避免高拷贝载体（如 pUC
上篇我们对经典分子克隆技术和无缝组装克隆技术进行了比较，经典分子克隆兜兜转转、如琢如磨，而无缝组装克隆技术却能做到操作简单和方便快捷。那它究竟是如何实现的呢？本期我们就来具体聊聊无缝克隆的四步致胜奇招。 无缝组装克隆之 Step 123——带你飞，把还在用传统方法“琢磨”的他甩在后面 基于同源序列的无缝组装克隆技术，关键是利用 PCR 引物，在目标片段两端引入与线性化载体两端同源的一段序列。基本策略是 选定插入外源片段的位置，以此线性化载体 设计包含线性化载体两端序列和目标片段两端序列的引物
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1000个细胞以上离心，去上清，PBS洗一遍，细胞沉淀溶于适量的PBS中，煮5min后模板就制备好了，剩余的pool细胞做有限稀释，一般5块板足够。 分析敲除位点的上下游序列，设计合适的引物PCR扩增目的基因片段，与野生型目的基因杂交后CruiserTM酶切15-20分钟，酶切产物1.5%-2%凝胶电泳。 上图为混合克隆pool酶切检测，由此图可知此混合克隆pool中有敲除成功的细胞，则进行下一步并计算突变率。这一步尤为重要，很多杂志投稿时需要这张图，或者有计算突变率的要求
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