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- 北京
- YT482-CBE
- 2025年07月11日
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长期
- 英文名：
N-Myc plasmid（with CMV promoter）
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211
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北京百奥莱博科技有限公司
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名称：N端Myc标签融合蛋白质粒优惠价
规格：1μg
产地：国产|进口
编号：YT482
英文名：N-Myc plasmid（with CMV promoter）
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和Myc tag(Myc标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5"端含有一个可以编码Myc标签的序列，因此可以表达出含有Myc标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| Myc tag | 679-708 |
| multiple cloning site | 711-784 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 827-848 |
| SV40 polyA signal | 860-1243 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 1381-1687 |
| bla promoter | 1712-1836 |
| SV40 promoter | 1856-2194 |
| neomycin/kanamycin resistance ORF | 2229-3020 |
| HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal | 3021-3479 |
| pUC origin | 3608-4275 |
本质粒的图谱如下：
使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件：-20℃。
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文献和实验一，酵母表达系统毕赤酵母表达系统（invitrogen公司）：分泌型质粒pPIC9K，宿主菌毕赤酵母GS115分泌型质粒pPICZalpha （甲醇诱导）宿主菌毕赤酵母x33分泌型质粒pHIL-S1二，原核表达质粒表达宿主菌为BL21(DE3)系列带His标签（N端）：PET5-(a)氨苄抗性带His标签（N端）：PET28-(a)卡那抗性带His标签（C端）：PET24-(b)卡那抗性带His标签（C端）：PET21-(a)氨苄抗性带His标签（N端）+TrxA(硫氧还蛋白)：PET-32
【求助】MDCK转染与免疫荧光问题，解决问题追加丁当，谢谢！
其功能，所以选择用标签染色的方法证实转染效果） 在每次免疫荧光之前我都会看一下GFP的荧光情况，有特异性的荧光表达。 然后我会对转染质粒的细胞进行染色。实验组的一抗我用的是c-myc,对照组1用的一抗为AQP1和c-myc,对照组3一抗用的是AQP1 试验结果：对照组3即阳性对照，能出现阳性结果，说明免疫荧光的操作没有问题。 对照组2，有GFP的荧光，说明至少转染GFP质粒没有问题。 但是，就是没法染出实验
前言: NusA融合蛋白表达系统于9年前（1999年）由Davis发明，并在2000年由Novagen首先进行商业化设计和开发，特别推荐用于以NusA作为N端标签时提高在大肠杆菌中难溶的重组表达蛋白的可溶性。NusA融合蛋白表达系统面市至今，已经通过一些高通量表达筛选的评估确认其在可溶性改善方面的有效性。关于NusA融合表达蛋白去除或不去除NusA标签，目的蛋白仍然具有活性的报道也有很多。正是由于NusA标签系统的这种特性，使其成为目前在大肠杆菌表达体系中使用最为广泛的三个融合标签
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