- ¥680
- TIANGEN
- 天根生化科技（北京）
- EM101-01
- 2025年11月04日
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400U
产品简介
表观遗传学是研究基因的核苷酸序列不发生改变的情况下，基因表达和调控的可遗传变化的一门遗传学分支学科。表观遗传的现象很多，比如RNA介导的基因沉默、组蛋白修饰等。在高等真核生物中一个主要的表观遗传学机制是DNA的甲基化。
本产品是特别针对通过PCR方法研究基因组DNA甲基化特点的客户所开发的试剂盒。试剂盒组分简单，包含MSP DNA Polymerase，10×MSP PCR Buffe和dNTPs。其中，MSP DNA Polymerase是采用抗体修饰的耐热聚合酶，10×MSP PCR Buffer是特别为MSP反应所优化的PCR缓冲液。本产品具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。适于与TIANGEN重亚硫酸盐处理试剂盒（DP215-02）搭配使用。
产品组成
1. 10×MSP PCR Buffer：
500 mM Tris-HCl (pH8.8)
200 mM KCl
15 mM MgCl2
其它稳定剂和增强剂
2. MSP DNA Polymerase（2.5 U/µl）
质量控制
SDS-PAGE检测纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。
使用说明
本产品使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量MSP DNA Polymerase，10×MSP PCR Buffer和dNTPs ，同时加入模板和引物，并加入ddH2O补足体积，使MSP PCR Buffer的浓度为1×即可进行反应。
适用范围
本产品适用于甲基化特异性PCR（MSP）方法分析基因组DNA的甲基化特点。
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- 内容
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文献和实验1. MSP原理：MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，然后用3对特异性的引物对所测基因的同一核苷酸序列进行扩增。扩增产物用DNA琼脂糖凝胶电泳，凝胶扫描观察分析结果。 此原理的关键在于3对特异引物的设计。引物序列设计在富含胞嘧啶区域以区别亚硫酸氢钠处理后转化的非甲基化的DNA与未转化的甲基化的DNA，在引物的3’端，至少含有3个CpG位点，以保证区别甲基化与非甲基化DNA
甲基化特异性 PCR(Methylmion Specific PCR，MSP)及其改进方法是检测基因甲基化的经典方法．MSP法的原理是首先用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶都被转化为 尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则不变。然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增，最后通过琼脂糖凝胶电泳分析，确定与引物互 补的DNA序列的甲基化状态。MSP法灵敏度较高，应用范围广。MSP 实验流程： 抽提基因组DNA，并定量 （组织、细胞、全血、血浆/清等）亚硫酸
酶的区域性甲基化特异性分析 (ERMA) 酶 的区域性甲基化分析是一种定量区域性CpG甲基化密度研究方法。基因组DNA在亚硫酸氢钠处理后，感兴趣的区域由包含dam位点的引物扩增。扩增后的PCR产物与14 C标记的SAM及dam甲基转移酶温育，作为标准DNA定量的内参照。之后将3 H标记的SAM和M．SssI甲基转移酶温育。在每个检测中使用具有确定甲基化位点细胞系DNA的标准混合物，每个样品的3 H／14 C比值转化为所测序列的甲基化密度百分比。该方法不能
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