- ¥17800
- 天根
- 中国
- KR118-03
- 2025年11月06日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
充足
- 供应商：
天根生化科技（北京）
- 规格：
20 μl×1000 次
本产品是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组DNA污染的反转录预混Mix。5× FastKing-RT SuperMix中不但含有RT-PCR中反转录反应所需的所有试剂（FastKing RT Enzyme、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT primer、dNTP Mixture、反应Buffer），还含有高效去除基因组DNA的热敏gDNase，使得RNA中残留基因组的去除与反转录反应同时进行，方便反转录操作。此外，热敏的gDNase生效快，效率高，作用时间短，在处理残留基因组DNA之后不会对cDNA造成影响。
本试剂盒所含的高效反转录酶FastKing RT Enzyme，是通过分子改造后的新型反转录酶，特别增加了疏水motif，具有更强的RNA亲和性和热稳定性，从而进一步提高了其反转录效率和反应速率，42℃、15 min即可完成cDNA第一链的合成。另外，由于新型酶与RNA亲和力的增强，使其在通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板和抗逆性等方面的表现也更为的突出。
产品特点
● 体系配制简单：本产品为预混Mix形式，只需加入模板RNA和水便可以进行反应。
● 反转录效率高：反转录效率可达95%以上。
● 反转录速度快：只需42℃，15 min即可完成cDNA第一链的合成，同时去除残留DNA。
● 通读复杂模板：能够作用于GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。
● 后续兼容性好：后续配合荧光定量检测产品，灵敏度高、稳定性好。
适用范围
RT-PCR；荧光定量RT-PCR；cDNA文库构建；SAGE(基因表达连续分析)；引物延伸。
实验例
实验例 1. 分别使用 TIANGEN KR118、国外 A 公司和国内 B 公司的一步法反转定量试剂合成cDNA，使用 TIANGEN FP209检测小鼠 RN5 基因，展示扩增曲线、熔解曲线和标准曲线。结果显示，TIANGEN KR118 反转录得到的 cDNA 量大，扩增 Ct靠前，特异性高，梯度优秀，特别对于低丰度模板的检测优于其他竞争试剂。
实验例 2. 分别使用 TIANGEN KR118、国外 A 公司和国内 B 公司的一步法反转定量试剂合成 cDNA，使用 TIANGEN FP209 检测人类 HsG 基因，并且人为添加不同浓度的基因组 DNA，检测不同试剂对基因组 DNA 的去除能力。Ct 结果显示，TIANGEN KR118 具有优秀的基因组 DNA 去除能力，多至 500 ng 的基因组 DNA 残留也能完美去除，不会对结果造成影响。ND：未检出。NRT：不做反转录，直接用混合物定量检测。
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文献和实验M-MLV第一链cDNA合成试剂盒-技术手册一、 试剂盒组成 Components SK2027 SK2028 5×M-MLV Reaction Buffer 100µl
的动态范围或线性度最佳，可确保基因表达定量的准确性。 所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的 cDNA 得率，以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混液形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。 RT-qPCR 的一个特殊程序是从未经 RNA 分离的粗细胞裂解物直接进行逆转录。在使用稀缺样本或选用群体内特定细胞的实验，可考虑使用直接 RT-qPCR 法来防止可能的样本损失和低 RNA 回收。 cDNA 克隆和文库构建 cDNA 文库可由代表特定样本中转录序列的 cDNA 克隆组成
分离高质量RNA 成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般的RNA纯化方法是使用异硫氰酸胍／酸性酚的一步法。Trizol试剂法（见下图）将一步法加以提高，可以从多种组织和细胞中提取高质量的非降解RNA。Trizol试剂法可以从最少100个细胞或1mg组织中提取RNA。TRIzol®试剂步骤略图 一般不必使用oligo(dT)选择性分离poly
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