大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS感受态细胞现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS感受态细胞现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS感受态细胞现货
规格：0.1mL*10
产地：国产|进口
英文名：E.coli Rosetta(DE3)plysS Rosetta Competent Cell
编号：BTN130558
 Rosetta(DE3)pLysS是Rosetta(DE3)的衍生菌株，为高度严紧表达宿主菌，一般用于毒性含真核蛋白靶蛋白表达，lac透性酶突变，可以控制表达水平，提供稀有密码子tRNAs。抗性为*霉素(34μg/ml)。

基因型：F-ompT hsdSB(rB- mB-)gal dcm lacY1(DE3)plysS pRARE(CmR)。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS感受态细胞现货极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·DOP-PCR试剂盒
编号：BTN111109
英文名称：Degenerate Oligonucleotide Primer PCR Kit
规格：50次
DOP-PCR即简并寡聚核苷酸引物PCR，是扩增全基因组的方法之一，它利用中间含有6个随机碱基的22nt引物，通过两轮PCR(第一轮低温复性，第二轮高温复性)而将模板DNA扩增。DOP-PCR扩完整基因组的效率不如利用phi 29 DNA聚合酶的MDA，但在扩增高度降解的痕量DNA 方面具有巨大优势，在法医鉴定领域具有重要应用。本产品就是在DOP-PCR基础上进行优化而开发。

产品特点：
1. 专门用于高度降解的DNA，方便，含有除模板DNA和引物以外的所有成份，简化了准备工作。
2. 优化的引物浓度，使自连序列和非模板相关序列的合成。
3. 使用高保真酶，降低突变率。
4. 长度在300-1700bp 之间，平均500bp左右。
5. 模板基因DNA 用量一般为10-100pg。
6. 所得PCR产物可用于STR 多重扩增、比较基因组杂交、单染色体文库构建、基因组图谱研究等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
DOP-PCR Magic Mix	750μl
DOP-PCR引物(20pmol/μL)	250μL
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存，保存期限为12个月。不要反复冻融。

使用方法：

1.在一干净的PCR 管中，加入下列成分：

成分	阴性对照	样品
DOP-PCR MagicMix	25μL	25μL
基因组DNA模板(自备)或单个细胞	不加	10-100pg(或一个单个细胞)
DOP-PCR引物(20 pmol/μL)	5μl	5μl
补水到	50μl	50μl

2. 放入PCR仪中按下列参数进行DOP-PCR。

预变性	95℃	5min
第一轮PCR(12个循环)	94℃	1min
	30℃	1.5min
	72℃(30℃升到72℃的时间设定为3分钟)	3min
第二轮PCR(35个循环)	94℃	1min
	62℃	1min
	72℃(每次循环后此步的保温时间延长14秒)	2min
延伸	72℃	7min
	4℃	Forever

3.结束后取5-10μl直接上样电泳(不需要额外再加DNA上样液)，红色染料电泳速度相当于50bp DNA片段。DOP-PCR产物的长度一般在300-1700bp之间。
4. 所得DOP-PCR产物可以用于后续PCR检测或其他分析。


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·dITP溶液(100mM)
编号：BTN130920
英文名称：dITP Solution(100mM)
规格：0.25mL
本产品纯度在98%以上(HPLC检测)，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。dITP不适合具有校正功能的聚合酶或含有校正酶的Mix催化的PCR扩增。

dITP(脱氧三磷酸次黄嘌呤核苷)，分子式为C10H12N4O13P3Na3，分子量是558.1，消光系数为12.2×103 M-1×cm-1(pH7.0)，λmax为249nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·包涵体大量纯化试剂盒
编号：BTN90510
英文名称：Inclusion Body Maxiprep Kit
规格：2次
本产品是包涵体微量纯化试剂盒的大提升级产品，用于大量，快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1.大量提取，1次可处理多达5升的菌液，相当于50次中量提取。
2.适合制备级别的包涵体纯化，需在50mL以上的离心管或离心瓶中完成。
3. 能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白在包涵体中所占比重达到60%以上。
4. 即可以选择高压裂解法，也可以采用酶学裂解法裂解细菌。
5. 得到的包涵体可以用于重折叠，也可以用于凝胶层析和动物免疫。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100mL
溶液B	250mL×2
包涵体溶解液	100ml
溶菌酶	100mg
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(溶菌酶需要-20℃保存，包涵体溶解液可以室温保存)，有效期一年。

自备试剂：如果得到的重组蛋白确有降解则需要自备蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。

使用方法：

一．细胞沉淀：
1．转移1-5升菌液到干净的、预称重量的塑料离心瓶中。如果离心瓶体积不够大，可以分多次反复离心收集。
2．5000g(相当于Sorvall GSA转头5500rpm)4℃离心15-30分钟，小心弃上清。
3．复称重量，差值就是细菌的湿重。1升的过夜培养的大肠杆菌湿重一般为3克，所以1-5升菌液一般能得到3-15克细菌。注意：后续操作的很多溶液都是按此步得到得细胞湿重添加。
4．细胞沉淀可以立即使用或存放在-80℃待用。

二．细胞裂解(下面两法中选其一)：
 高压破碎法(French Press)+超声法(推荐方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌或用Waring捣碎机匀浆(如果细菌湿重超过10克)使细菌悬浮，直到检测不到成块的细胞为止。如有必要，可以加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL。
2．让细胞通过压力为16000-18000 lb/in2的高压细胞破碎仪，收集的细胞裂解液需放冰上。
3．重复上步操作一次或多次，直到绝大部分细菌都被裂解。注意：每次处理后最好在显微镜下检查细菌裂解的比例。
4．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。
 酶法+超声法(在没有高压破碎仪器时首选方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL的含溶菌酶的溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌细菌沉淀使之悬浮。
2．在细菌悬浮液中加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL，搅拌混匀后37℃放置30分钟裂解细菌，其间不时需要用玻璃棒混匀。细菌释放出的DNA将使裂解物变得十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要继续裂解，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。由于处理量大，最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
3．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。

三．包涵体纯化：
1．将超声处理的细胞裂解液转移到离心瓶中，22000g 4℃下高速离心60分钟(注意：转子不同其对应的离心速度不同)，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为SDS-PAGE对照样品。
2. 将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在预冷的溶液B中。每克细菌需要5mL溶液B，1升细菌的湿重约3克，大约需要15mL溶液B，用玻璃棒或匀浆器搅拌混匀后室温放置5分钟。
3．22000g 4℃下高速离心30分钟，沉淀将出现三层，最下面的是未彻底破裂的细胞碎片，其上是包涵体，最上层的松软沉淀是细胞壁和细胞外膜。如果处理过程中使用过溶菌酶，则此层较薄。小心收集上清，可以作为包涵体第一次洗涤的对照样品。
4．重复第8-第9步直到上清变清和最上层细胞壁和细胞外膜松软沉淀消失，此过程一般需要重复洗涤2次(共3次洗涤)，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤和第三次洗涤的对照样品。本试剂盒提供的溶液B足够一次5升规模的提取洗3次，如需更多溶液B请单独购买。
5．上步得到的沉淀即为包涵体，其中重组蛋白一般占60%重量，其余40%为其他蛋白质。此沉淀可以长期放置在-80℃冰箱待用，也可以直接用于免疫动物制备抗体，还可以直接进入下面得包涵体的溶解步骤。
6．估计重组蛋白的产率：首先需要通过预实验知道重组蛋白的表达水品，如果表达水平为1%，则1克湿重的细菌中将含有1mg重组蛋白质。此法得到的重组蛋白质的回收率一般在75%，即1mg重组蛋白质能得到0.75mg，丢失0.25mg。

四．包涵体的溶解：
1．在室温下，将包涵体溶解液加入到包涵体沉淀中，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果需要将溶解的包涵体直接用于凝胶过滤层析进一步纯化，则按每克原始细胞湿重加入1mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为4-5mg/mL；如果需要将溶解的包涵体直接用于蛋白质折叠，则按每克原始细胞湿重加入3mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为1-2mg/mL；注意：包涵体溶解液低温放置会产生沉淀，必须45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2．室温放置1小时使蛋白质充分溶解。
3．100,000g 4℃离心60分钟(转速需要根据离心机转子的大小换算)，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4．将上清(溶解的包涵体)分成10-20mL一份，放于塑料离心管中(不要超过离心管容量的70%)置-80℃长期保存或直接用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的最佳复性条件，需要用户自己摸索。包涵体纯化过程中引入了溶菌酶，在SDS-PAGE分析时可能有额外条带出现。


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(*并三氮唑-1-基氧基)二吡*(代"咯")烷碳六*磷酸盐 3,5-Dinitrosalicylic acid 105379-24-6
517-28-2 苏木色精 Hematoxylin
肾上腺酮 Fmoc-Phe-OH 50-22-6
BTN130634 人源脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶 APE 1
ARB10792 人抗内因子抗体(IFA)酶联免疫定量检测 Human intrinsic factor antibody,ifa ELISA KIT
6-*基正己酸 L-Homocystine 60-32-2
BTN130575 小鼠抗c-Myc标签单抗 Anti c-Myc-Tag Mouse Mab
ARB13503 鸡碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA代测服务 Chicken basic fibroblast growth factor,bfgf ELISA KIT
29915-38-6 TAPS 三羟甲基甲胺基丙磺酸/3-三(羟甲基)甲基-3-*基丙*(代"烷")磺酸
ARB12330 大鼠免疫球蛋白M(IgM)含量测试 Rat immunoglobulin m,IgM ELISA KIT
BTN120409 BAL 31核酸酶 BAL 31 Nuclease
细胞色素C Sodium dodecanoate 9007-43-6
ARB14165 牛口蹄疫A型抗体(FMD-A-Ab)酶标法分析 
F030311 胶体金标记羊抗乙肝核心抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBcAg*GOLD
F030204 HRP标记小鼠抗猴IgG抗体 Monoclonal Mouse Anti-Monkey IgG*HRP
CBZ-L-羟脯*酸 AMPSO sodiu*(代"m") salt 13504-85-3
BFD045 呕吐毒素快速检测试剂盒
刚果红 Inulin 573-58-0
BTN120411 T4 DNA聚合酶 T4 DNA Polymerase
PY02-061  抗生素检定培养基Ⅰ号(PH7.8-8.0)  250克  
ARB10384 人可溶性CD28(sCD28)elisa检测说明书 Human soluble cluster of differentiation 28,scd28 ELISA KIT
PY08-076  磷酸盐缓冲液 9ml  20支/盒  用作稀释液

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