BTN130560型大肠杆菌Rosetta-gami (DE

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

BTN130560型大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞厂商由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

名称：BTN130560型大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞厂商
规格：0.1mL*10
品牌：百奥莱博
英文名：E.coli Rosetta-gami (DE3)pLys Chemical Competent Cell
产地：国产|进口
 Rosetta-gami(DE3)pLysS是Rosetta-gami(DE3)的的衍生菌株，用于具有毒性的含二硫键真核蛋白的表达。它是高度严紧表达宿主菌，包括Tunerlac 透性酶突变以及gor B/gor突变帮助细胞质内二硫键形成。

基因型：Δ(ara–leu)7697 Δ lac X74 Δ phoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F"[lac+lacIq pro](DE3)gor522::Tn10(TcR)gorB::kan plysS pRARE(CmR)

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

关于BTN130560型大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞厂商的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·内毒素清除试剂盒
编号：BTN160692
英文名称：Endotoxin removing Kit
规格：1.5mL
本试剂盒使用的是一类高效内毒素清除树脂，它以修饰过的多粘菌素B(PMB)为配体，进行特异性的内毒素清除。经此专用亲和介质纯化，样品最终的内毒素水平可低于0.1 EU/mL。

细菌内毒素(脂多糖，LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中，发现细菌内毒素在其中起着关键的作用，内毒素使机体免疫功能严重受损，进一步的发展可能引发脓毒性休克，弥散性血管内凝血，急性呼吸窘迫综合症，全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。因此，内毒素的清除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的，尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。

试剂盒特点：
1.高稳定性，高去除效率。
2.高结合力：> 2000,000 EU/mL。
3. pH范围为5-10时，亲和介质对内毒素的清除率在92%以上；pH值在7-8时，清除效率最高。
4. 无需恒流泵即可调节流速。
5. 重复使用 5次不会改变柱子效果。
6. 使用方便，试剂盒中提供无热原缓冲液，无热原收集管及无热原枪头等。
7.适合纯化对象为蛋白，多肽，抗体，多糖等。
8.可耐受试剂：20% DMSO，20% 乙醇，20% 甘油;1 M 尿素，300mM咪唑; 0.05% 吐温-20，10mM DTT等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
专用亲和介质	1.5mL预装柱
再生缓冲液	125ml
平衡缓冲液	125ml
流速控制器	1个
无热原接收管	1 包(3 支/包)
无热原枪头(1mL)	2 包(6 支/包)
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.样品处理：样品的pH值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。虽然结合内毒素的pH范围在6-9，但是7-8的pH范围是纯化的最佳范围。合适的离子浓度可以降低非特异性吸附，0.15-0.5 M NaCl的条件可以得到一个很好的去除效率和低的样品损失。所以，纯化之前可以使用处理过的*化*，0.1 M的*氧化*或0.1 M盐*(代"酸")来调节离子强度或pH值。
2.活化亲和介质：将预装柱置于铁架台，垂直固定，去除预装柱顶部的盖子，打开流速控制器，使保护液在重力作用下流干，加入5mL的(预冷)再生缓冲液，调节流速控制器，保持流速在0.25mL/min(或者10滴/min)，待再生缓冲液流干，再加入5mL 再生缓冲液，再重复操作两次，确保体系保持无热原(即内毒素)存在。即使是第一次使用也必须进行这一步操作。这步操作大约需要60分钟完成。
3. 平衡亲和介质：活化完毕后，加入6mL的(预冷)平衡缓冲液，调节流速控制器，保持流速在0.5mL/min，流干平衡缓冲液，再按此操作重复两次。这步操作大约需要40分钟完成。
4.内毒素清除：将流速控制器关闭，使用无热原枪头将样品加入，打开控制器，控制流速不高于0.25mL/min，流出液体积达到1.5mL后，使用无热原接收管接受样品，样品流干后，再加入1.5mL-3.0mL的(预冷)平衡缓冲液淋洗，收集淋洗液。检测样品浓度及内毒素水平。
5. 再次使用：如果流出样品内毒素水平未能达到预期值，需要将预装柱重新再生，按照步骤1 重新再生，然后上样纯化。
6. 储存条件：如果预装柱用完后需要保存，先用10mL 平衡缓冲液平衡柱子，待平衡液流干，加入1.5mL的再生缓冲液(含0.02%的叠氮化*)。


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·DNA marker(φX174 DNA/Hinc II)
编号：BTN90602I
英文名称：DNA ladder(φX174 DNA/Hinc II)
规格：50次
 本系列产品为传统的酶切分子量标准，由单一的质粒DNA或噬菌体DNA经单个限制性内切酶完成消化后，加热灭活而成。每次上样总DNA含量已知，每条带的含量可根据其摩尔数的比值计算出来。本系列产品成分中已经含有上样缓冲液，所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。
 每次加样量为5μL，可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：直接上样电泳，每次加样量为5uL。

使用效果：


疑难解答：
a)如对带型要求较高，建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液，电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液，电压为80V)，同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖，同时要经常更换电泳缓冲液。


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·耐热型MMLV逆转录酶(无RNase H活性)
编号：BTN131210
英文名称：Thermal Stable MMLV Reverse Transcriptase (H-)
规格：10000U
本产品为点突变型M-MLV逆转录酶(RNase H缺失)，拥有RNA和DNA聚合酶活性，但由于在RNase H结构域内进行了点突变，该酶缺少RNase H的活性，不会降解第一链CDNA 合成时形成的RNA-DNA 复合物中的RNA，从而可以从长模板中获得高产量的全长cDNA。缺失了RNase H活性的逆转录酶为长cDNA的制备及包含高比例全长cDNA的文库制备提供了更好的选择。

产品特点：
1．温度稳定性，点突变产物的热稳定性可防止与二级结构相关的问题，增强了与模板的亲和力。
2．能够在较宽的温度范围内保持活性，在42-45℃之间具有最佳活性，在温度高达55℃时仍有活性。
3．聚合酶活性增强，本产品与其它缺失突变得到的M-MLV 逆转录酶相比，具有更高的cDNA产率。
4．高产量制备全长的第一链cDNA，最长可达13kb。合成时可掺入带有修饰的核苷酸(例如 Cy3-、Cy5-、罗丹明-、*基烯丙基-、荧光素-标记的核苷酸)。
5．广泛的工作范围：提高了逆转录的性能，使得可以在更广泛的酶浓度和底物浓度的条件下工作。

产品组成：

成分	规格
耐热型MMLV逆转录酶(H-)，200U/μL	50μl
5×RT Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．在无RNase的PCR管中加入如下成分：

成分	用量
▶RNA模板
Total RNA 或poly(A)RNA 或specific RNA	0.1ng-5μg 10pg-500ng 0.01 pg-0.5μg
▶引物
Oligo dT18 或随机引物 或基因特异引物	0.5μg(100pmol) 0.2μg(100 pmol) 15-20 pmol
▶RNase-free水	Up to 12.5μL

2．对富含二级结构的高GC RNA模板，65℃保温5分钟后迅速冰浴2-10分钟。
3．离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。
4．按顺序向上述反应液中加入下表各成分，反应终体积为20μL：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor	0.5μL(20U)
dNTP Mix，10mM each	2μL(终浓度1mM)
耐热型MMLV逆转录酶(H-)	1μL(200U)

 轻柔混匀，短暂离心。
5．42℃保温60分钟(Oligo dT18或基因特异引物)；如果是随机引物则先在25℃保温10分钟，然后再转移至42℃保温60分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板保温温度可以设为55℃。
6．70℃保温10分钟终止反应后置冰上冷却，得到cDNA。该产物可直接用于PCR扩增或-20℃保存。

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