T3体外转录试剂盒哪里卖

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百奥莱博专业生产供应T3体外转录试剂盒哪里卖，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：T3体外转录试剂盒哪里卖
编号：BTN91108
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：50次
英文名：T3 in vitro Transcription Kit
本试剂盒是基于沙门氏噬菌体T3 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有T3启动子的模版DNA，以NTP为底物，从T3启动子下游开始合成与模板DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含T3启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需耍单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模板DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到5000nt之问。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模板可以合成2-6μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA结构研究、核解生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 Kb片段)	20μL(10ng/μL)
T3 RNA聚合酶混合液	50μL
RNase-free水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点：
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T3启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T3启动子序列(5´AATTAACCCTCACTAAAGG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T3启动子的载体，并且克隆位点必须位于T3启动子下游。
3)是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。
4)是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板	xμl	总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建议用50ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本产品提供的阳性对照，建议用4μL)
转录预配液，2×	10μl	需室温时使用
T3 RNA聚合酶混合液	1μl	本成分还含其他促进剂，所以是混合物
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他体积的反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要定做NTP分开而不是NTP预先混合的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活T3 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录结束后，在反应体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL，
4. 用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1、没有RNA产物。最常见原因是DNA模板有RNase污染，测试方法是用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板序列。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T3 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6或T7体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6或T7启动子)。
4、RNA长度比预计的长。T3 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5、5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则T3 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。

关于T3体外转录试剂盒哪里卖的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·Oligo(dT)再生溶液
编号：BTN130976
英文名称：Oligo(dT) Recharger
规格：250mL
本产品是针对Oligo(dT)纤维素再生的溶液，可有效去除亲和基质中的残留RNA和其他杂质，恢复Oligo(dT)纤维素基质的结合能力。

储存条件：常温运输和保存、避光。有效期一年。

·9°N DNA连接酶
编号：BTN130624
英文名称：9°N DNA Ligase
规格：2500U
9°N DNA连接酶能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5´-磷酸末端和3´-羟基末端通过磷酸二酯键相连。该酶在45℃-90℃范围内均有活性。

产品用途：
1．可在高温条件下，连接DNA链上的切刻位点；
2．具有极高的耐热性，与PCR反应条件兼容；
3．可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测；
4．通过PCR扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变。

产品组成：

组份	规格
9°N DNA连接酶(40000U/mL)	62.5μL
10×Buffer	1.5mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指50μl反应体系中，45℃条件下，15分钟能使50%的1μg BstEII消化的λDNA片段(12bp 粘性末端)发生连接所需要的酶量。粘性末端活性单位相当于切口封闭单位。

注意事项：9°N DNA连接酶不能代替T4 DNA连接酶使用。该酶可以有效连接12bp的互补片段，但却无法连接4bp的互补片段(典型限制酶消化产物)。


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·微量DNA助沉剂
编号：BTN3621
英文名称：DNApp DNA precipitation aid
规格：0.5mL
本品是一种经去DNase处理的，能有效地促进微量DNA沉淀回收的大分子聚合物。适用于提取样品中的微量DNA。该产品也适用于微量DNA的沉淀回收。

产品特点：
1．促进微量DNA的沉淀，其沉淀条件跟DNA相同的，5μl DNApp能有效促进微量DNA的乙醇或异丙醇沉淀和回收。
2．使用多样，可以在核酸提取的任何步骤中加入。既可以加到提取液中，也可以加到稀释的DNA样品中。
3．化学惰性，不含DNase，不影响核酸的A260/280光吸收，不影响后续的反应过程(如PCR和酶切等)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：用于提取微量组织样品中的DNA
加入裂解液中使用: 按10-20μl DNApp/mL 裂解液的比例将DNApp 加入常用DNA提取液中，然后按相应的操作规程直接提取DNA。如果裂解液中含有CTAB，则需要在最后醇沉淀时加入，后续处理不变。

二：用于沉淀回收反应体系中的微量DNA
直接将5-10μl DNApp 加入待沉淀的DNA溶液中，然后按盐/乙醇或盐/异丙醇沉淀DNA的经典操作规程沉淀DNA。


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柠檬酸铋铵 DL-Lactic acid 31886-41-6
7761-88-*(代"8") 硝酸*(代"银")
α-半乳糖苷酶 SP Sephadex C-25 9025-35-8
BTN120698 青霉素G*盐溶 Penicillin G Sodium Solution
大孔吸附树脂D101 1-β-D-Arabinofuranosylthymine 9060-05-3
柠檬酸铵 dNTPs 3458-72-8
L-*丙*酸甲酯盐*(代"酸")盐 PGN 7524-50-7
ARB13234 小鼠淋巴细胞因子elisa检测操作说明书 Mouse lymphocyte factor ELISA KIT
六*异丙醇 Tetraethylammonium iodide 920-66-1
羟甲基树脂 α-Naphtholbenzein
BL0817 HRP标记羊抗兔IgG抗体
ARB12376 大鼠质细胞源性神经营养因子(GDNF)ELISA检测服务 Rat glial cell line-derived neurotrophic factor,gdnf ELISA KIT
BL1387 SABC兔IgG-POD kit
F030434 胶体金标记山羊抗人IgG抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG*GOLD
F030841 BIOTIN标记小鼠抗鸡IgY(IgG)抗体 Monoclonal Mouse Anti-Chicken IgY*BIOTIN
ARB12869 小鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)elisa测定使用说明书 Mouse soluble cluster of differentiation 86,scd86 ELISA KIT
9002-07-7 Trypsin 1:250  胰蛋白酶1:250
FMOC-L-谷*酸5-叔丁酯 ONPG 71989-18-9
ARB13306 小鼠癌胚抗原(CEA/CD66)elisa检测操作说明书 Mouse carcinoembryonic antign,cea ELISA KIT
ARB11682 人超敏游离雌三醇(uE3)含量测试 Human ultra estriol,ue3 ELISA KIT
ARB10797 人抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)代做ELISA实验 Human anti-cardiolipin antibody igg,aca-igG ELISA KIT
PY02-242  牛津琼脂(OXA)基础  250克  

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