北京植物RNA提取试剂盒(含DNase I)报价

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北京植物RNA提取试剂盒(含DNase I)报价的品牌：百奥莱博，是优质的RNA纯化产品，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多植物RNA提取试剂盒(含DNase I)等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。

名称：北京植物RNA提取试剂盒(含DNase I)报价
编号：WE0200
产地：国产|进口
规格：50次
英文名：RNAtiqu Plant RNA Extraction Kit(DNase I)
  本试剂盒用于从各种植物中提取纯化高品质总RNA，也适用于真菌菌丝RNA的提取。独特的Shredder分离柱，用于匀质化和过滤高粘度的植物或真菌裂解物，同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化，使多聚糖等各种污染物通过洗涤被有效去除，经洗脱的RNA可直接用于各种下游实验。由本试剂盒提取RNA分子量大于200碱基，纯度高，几乎无DNA残留。如果是对微量DNA非常敏感的RNA实验，残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除。提取的RNA可用于Northern Blot、Dot Blot 、RT-PCR和体外翻译等实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RL	35ml
Buffer RLC	35ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
过滤柱FL及收集管	50套
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
② 配制溶液应使用无RNase的水。
③ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
② 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
③ 配制溶液应使用无RNase的水。
④ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
3、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取的量和质量。
4、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。Buffer RLC使用时不需加β-巯基乙醇。
5、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
6、Buffer RL和Buffer RLC如果产生沉淀，请加热使其溶解后室温放置。
7、所有离心步骤均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、50-100 mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末，加入600μl Buffer RL(使用前检查是否加入β-巯基乙醇)或Buffer RLC。涡旋振荡使其充分裂解。
注意：
① Buffer RL主要成分为异硫*酸胍，适用于大多数植物组织的裂解。但有些植物组织(如玉米的胚乳)，由于次级代谢产物较特殊，异硫*酸胍使样品产生沉淀，导致RNA提取效果不佳，此时可加入Buffer RLC替代Buffer RL。
② 56℃孵育1-3分钟有助于组织的裂解，但是淀粉含量高的植物不要进行高温孵育。
2、将步骤1所得全部液体转移至已装入收集管的过滤柱中，12000rpm(~～13400×g)离心2分钟，将收集管中的上清液转移到一个新的离心管(自备)中。
注意：
① 在吸取液体时可以将枪头尖端剪掉，便于取样。
② 过滤柱FL可以除去大部分的碎片，但仍会有小部分流出，离心后会在收集管内形成沉淀，在进行下一步时注意避免吸到沉淀。
3、在步骤2所得干净的裂解液中加入0.5倍体积的无水乙醇，迅速混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，但不影响后续试验。
4、将上步得到的溶液转移到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入; 12000rpm离心15秒，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1, 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心15秒,弃废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心1分钟，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中的无水乙醇。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱装入新的离心管中，向吸附膜的中间加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
① RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
③ 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。

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·细菌基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0178
英文名称：Bacteria Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌中提取高纯度总DNA，也适用于真菌等样本。本试剂盒每次可处理106-108个细胞，获得多至20μg总DNA。纯化过程中不需*酚或*仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀，一小时内即可获得高纯度DNA。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上，而其他污染物可流过膜，PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DM及收集管	50套

产品特点：
1、适用于从革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌等样品中分离纯化基因组DNA。
2、无需使用有机溶剂，彻底去除污染物以及下游反应抑制物，快速提取高品质DNA。

自备试剂：无水乙醇；提取革兰氏阳性菌需自备Enzymatic Lysis Buffer。
Enzymatic Lysis Buffer配制方法：20 mM Tris，pH8.0；2 mM Na2-EDTA，pH8.0；1.2% Triton X-100。121℃灭菌处理20分钟，加入适量的Lysozyme(溶菌酶)其终浓度为20mg/ml。详细配制方法可登录百奥莱博网站，搜索WE0178S产品查询。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组，建议在对数生长期早期收集样品。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀出现，请将Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
7、如果提取样品为革兰氏阳性菌，需客户自行配制Enzymatic Lysis Buffer处理菌体，其中需使用浓度为20 mg/ml的Lysozyme(溶菌酶)，Lysozyme本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0214S。

操作步骤：

一、革兰氏阴性菌基因组DNA的提取：
1、取细菌培养物1-5ml(106-108个细胞，最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中，12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，尽量吸净上清。
2、向沉淀中加入180μl Buffer GTL，振荡使菌体重悬。
3、加入20μl 蛋白酶K ，涡旋混匀，56℃孵育，直至溶液变清亮，孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散。
注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
4、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡充分混匀。加200μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)如果多个样品一起操作，Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入，震荡混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
5、将步骤4所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
8、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤9；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μlBuffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

二、革兰氏阳性菌基因组DNA的提取：
1、取细菌培养物1-5ml(106-108个细胞，最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中，12000rpm(～13400×g)离心1分钟，尽量吸净上清。
2、加入180μl Enzymatic Lysis Buffer(自备)使菌体重悬。Enzymatic Lysis Buffer配制方法见说明书前部分自备试剂。
3、37℃孵育30分钟。
4、加入20μl 蛋白酶K 涡旋震荡，充分混匀。加入200μl Buffer GL，涡旋震荡混匀。
注意：不要把蛋白酶K 直接加到Buffer GL中。
5、56℃孵育30分钟。
注意：
1)如果需要，95℃孵育15分钟可以使病原体失活，但是95℃孵育会造成一些DNA的降解。
2)如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
6、加入200μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。
注意：加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
7、将步骤6所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤9。
10、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新离心管(自备)中，向吸附柱中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤11；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

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